如何做好RNA質控

樣品中RNA的純度及整體質量對于后續的實驗有重要的影響。

以下是進行PCR array前RNA質控的推薦標準：

定量：NanoDrop/Spectrophotometer（用于檢測樣本中的核酸濃度，蛋白與核酸的比例及是否存在污染，例如有機物/鹽離子等污染）。請記錄樣品的濃度，230，260及280的吸光值。此方法無法評估RNA的完整性。

● 濃度：最佳濃度是100-150ng/uL。如果低于此濃度，可以使用PreAMP system或者通過濃縮的方法提高RNA濃度。可以通過配套的QIAGEN 過濾柱，減小洗脫體積來實現樣品的濃縮。通過撥打QIAGEN客戶服務熱線400-880-0325，可以獲得樣品濃縮方面的幫助。

● 260/280比值：這一比值用于反應RNA濃度與蛋白濃度的比值。理想值應當在1.8-2.0，如果比值低于1.8，表明存在蛋白或其他污染。

● 260/230比值：這一比值用于反應RNA濃度與共提取污染的比值。理想值應當在1.8-2.2，如果比值低于1.8，表明存在有機物/鹽離子等污染。這些污染會影響后續qPCR反應。

RNA完整性檢測：

通過凝膠電泳或bioanalyzer來分析RNA的完整度，從而保證RNA的質量，防止RNA的降解對后續實驗的影響。以下內容是RNA完整度的通用標準：

● 28S/18S比值：>1.5為高質量，1.3-1.5勉強可用，<1.3為較差質量

● RNA Integrity Number (RIN): > 7為高質量，6-7勉強可用，< 6為較差質量

RNA完整性的圖例：（A）較好，（B）勉強可用，（C）較差
● 凝膠電泳的圖例：泳道1，2為較好，泳道3勉強可用，泳道4為較差的質量