HIV RNA定量測定（病毒載量測定）標準操作規(guī)程(SOP)
1 范圍
本章規(guī)定了測定HIV病毒載量常用方法的實驗室條件、方法、結(jié)果判定以及應(yīng)用,適用于血漿中HIV病毒載量的測定。
2 規(guī)范性引用文件
Guidelines for the Use of Antiretroviral HIV-Infected Adults and Adolescents MMWR Recommendations and Reports April 24, 1998/47(RR-5); 42-82.
Chiron? Product insert (Quantiplex? HIV-RNA), L6170 rev 5.0, June 1994 Roche AMPLICOR HIV MONITOR? TEST Procedure Manual.
Fractions of HIV-1 Seropositive Persons by Two Nucleic Acid Amplification Assays, AIDS. Research and Human Retrovirus 1993; (9):259-265.
試劑準備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)。各區(qū)的功能是：
3.1.1.1 試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制、分裝和保存。
3.1.1.2 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。
3.1.1.3 擴增區(qū)：核酸擴增。
3.1.1.4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報告。
3.1.2 擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔。
3.1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制。
3.1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：
3.1.4.1 在生物安全柜內(nèi)操作。
3.1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
3.1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
3.1.4.4 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。推薦的程序是：
（1）實驗前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。
（2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進行試驗。
（3）一個實驗區(qū)域在同一時間段只進行一種實驗。
（4）實驗結(jié)束后，移出個人專用材料至個人專用區(qū)域保管；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。
3.1.5 各區(qū)域的 儀器 、設(shè)備、器具、工作服和試劑應(yīng)為該區(qū)專用，不得交叉使用。
3.2 人員
進行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn)。
3.3 設(shè)施和設(shè)備
3.3.1 根據(jù)檢測項目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備。
3.3.2 各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備：
3.3.2.1 試劑準備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。
3.3.2.2 樣品處理區(qū)：冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器。
3.3.2.3 擴增區(qū)：核酸擴增設(shè)備、冰箱、離心機、加樣器、廢棄物容器。
3.3.2.4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱、離心機、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、核酸污染物處理設(shè)備等。
3.3.2.5 配備-80℃冰箱。
3.3.3 各區(qū)域應(yīng)備有工作人員專用的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套，必要時配備防護眼鏡和/或口罩。
4 方法和試劑
4.1 方法
常用的HIV RNA定量測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）。
4.2 試劑
HIV RNA定量檢測包括bDNA、RT-PCR、NASBA試劑。
5 實驗室管理
HIV核酸檢測實驗室應(yīng)制定嚴格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規(guī)定并嚴格遵照執(zhí)行。
5.1 生物安全
必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。
5.2 嚴格執(zhí)行分區(qū)制度
5.2.1 按照要求嚴格進行實驗室分區(qū)。
5.2.2 各區(qū)域只用于特定的操作，不得從事其它工作。
