用普通的提取法從組織中提取RNA

1.1 勻漿
1) 每個無菌的2 ml圓底離心管中加入1ml TRIZOL試劑，每個大鼠的腺垂體從-80°C取出后立即于預冷的TRIZOL試劑里用POLYTRON組織勻漿器（瑞士）進行勻漿。
【注：1. 勻漿液的量按每50-100 mg組織加1 ml TRIZOL，樣品的體積不能超過勻漿液體積的10%。 2. TRIZOL試劑用前應于4°C保存，操作時應帶手套和口罩。3. 勻漿器頭用前需在3% H2O2（DEPCC水配）里浸泡，然后于0.1% DEPC水中空轉2次，最后于TRIZOL試劑中空轉2次，方可用于勻漿。4. 勻漿時間不宜太長，轉速不宜過大，剛開始時由慢到快至中檔處，然后減速，重復1-2次，未見有組織碎塊即可．５．假如樣品數多的話，可先將TRIZOL試劑一并加好，然后逐一加入樣品勻漿。６.　特注：每加完一種試劑，都應及時蓋上管蓋，夾取管子或者打開管子時，盡可能不要碰到管的內緣。】。
2) 將勻漿樣品置于15-30°C下靜置5分鐘，以使核酸蛋白復合物完全分離。假如所提取的組織中含有較多的蛋白、脂肪等，則應在勻漿結束后將勻漿液于4°C，12000 g，離心10分鐘，取上清用于以下操作。
【注：假如此勻漿液暫時不用于實驗，可于-80°C下保存至少1個月。】
1.2 RNA 提取
1) 加0.15 ml氯仿（每1 ml勻漿液加0.2 ml氯仿），蓋好管蓋，用手劇烈振蕩15秒，于15-30°C下靜置3分鐘。
【注：假如樣品數多的話，可先于一個無菌的離心管中倒入適量的氯仿，而勿需每次從大瓶子里吸取，這樣可以減少污染，亦可加快速度】
2) 4°C，12000 g，離心10分鐘。
3) 小心吸出上層無色溶液（約為勻漿液體積的60%）于另一個1.5 ml無RNAase的離心管中。
【注：此步非常需要注重的是，在吸取上清時，切勿切勿將中間和底層的有機相吸出，寧愿少吸一點上清。同時，最好是用小槍頭吸，這樣就可以保證不吸到中間相】
4) 加無RNAase的糖原10 μg（終濃度約為250 μg/ml，最多不能大于4 mg/ml），蓋好管蓋，充分振蕩后，加入等體積的異丙醇（約400 μl），室溫靜置10分鐘。
【注：1. 糖原應不含RNAase，其作用是能夠攜帶液相RNA溶液，有助于其沉淀。2. 在4°C下靜置輕易使其它不重要的物質沉淀下來，所以最好在室溫下靜置。3. 假如樣品數多的話，可先于一個無菌的離心管中倒入適量的異丙醇，而勿需每次從大瓶子里吸取，這樣可以減少污染，亦可加快速度。】
4) 4°C，12000 g，離心10分鐘。
5) 小心倒去上清。加0.75 ml 75％乙醇清洗沉淀（0.1％DEPC水配制。緩慢用槍頭打起沉淀，均勻吹打幾次。每1 ml勻漿液加1 ml 75％乙醇），渦旋振蕩，混勻。
【注：假如沉淀暫時不用于實驗，可在加入0.75 ml 75％乙醇后，于4°C下至少可以保存1周，或于-20°C下至少可以保存1年。】
6) 4°C，7500 g，離心5分鐘。
7) 重復步驟5)-6)。
8) 小心倒去上清，輕甩2下后，用移液器小心將離心管內殘余的液體吸出，打開管蓋，將沉淀于操凈臺上晾干（5分鐘即可，完全晾干后反而會降低沉淀的溶解另外，亦可將裝有沉淀的管子蓋緊蓋子后，放進一次性手套中，然后打開管蓋，稍微包扎手套后，于50°C烘箱中放置3分鐘即可）。
【注：假如來不急做完下面的工作，可將步驟8）所得到的沉淀于-80 °C保存。第二天直接從步驟 9)開始做，這樣就可以增加RNA的保存，防止降解。