人脂肪干細胞源外泌體對HaCaT細胞損傷修復及遷移功能影響

臨床上，各種炎癥、潰瘍、燒傷等造成皮膚的損傷修復是亟需解決的問題。研究表明，脂肪組織來源的干細胞促進皮膚創傷修復的一個重要作用途徑是旁分泌，旁分泌的載體外泌體可能是促進創傷愈合的關鍵因素。與直接使用干細胞相比，富集了來源細胞的蛋白質、mRNA和miRNA等信號分子的外泌體具有生物相容性、低毒性、低免疫原性等安全性特性。相對于其他干細胞來源，人脂肪干細胞（human adipose-derived stem cells，hADSC）來源容易且體外擴增速度快，外泌體獲得更為容易，因此hADSC的外泌體更適合運用于皮膚創傷修復。

為了初步探究人脂肪干細胞源外泌體對表皮細胞遷移功能的影響， 深圳大學第一附屬醫院張遠遠，曾悅，朱艷霞，等人從正常人抽脂手術中獲取的脂肪組織分離培養脂肪干細胞，采用超速離心和超濾結合的改良法分離收集細胞上清液中的外泌體，采用透射電鏡、動態光散射法以及Western印跡法鑒定分離出的外泌體。采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分別作用HaCaT細胞1 h，CCK8法檢測H2O2對HaCaT細胞存活率的影響。將HaCaT細胞分為正常組（無預處理）和損傷組（用100 μmol/L H2O2損傷預處理0.5 h），再將兩組分別分為對照組和治療組，治療組與外泌體共培養，對照組不與外泌體共培養。用共聚焦熒光顯微鏡觀察PKH26熒光標記的外泌體是否能被細胞吞噬，用劃痕實驗觀察HaCaT細胞修復率，用Transwell實驗評估細胞遷移能力。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD檢驗，相關性檢驗采用Spearman檢驗。

透射電鏡觀察顯示，分離所得的脂肪干細胞源外泌體是直徑60 ~ 80 nm的茶托樣納米囊泡，而動態光散射法測量顯示，分離的外泌體純度為65.88%，表達CD63、Alix和TSG101，具有外泌體的基本特征。CCK8法顯示，0 ~ 800 μmol/L H2O2處理HaCaT細胞1 h后細胞存活率呈逐漸降低趨勢，H2O2濃度與HaCaT細胞存活率呈負相關（r = -0.91，P < 0.01）。共聚焦熒光顯微鏡觀察，分離的外泌體能被損傷后的HaCaT細胞攝入。劃痕實驗顯示，正常對照組、正常治療組、損傷對照組、損傷治療組HaCaT細胞12 h劃痕面積修復率分別是40.26% ± 0.64%、69.57% ± 0.69%、32.28% ± 0.31%、69.62% ± 1.68%，損傷治療組顯著高于損傷對照組（t = 37.33，P < 0.01）。Transwell實驗結果顯示，4組10倍視野下遷移細胞數分別是20.85 ± 4.84、44.8 ± 5.24、14.95 ± 2.58、40.05 ± 7.66，損傷治療組大于損傷對照組（t = 25.10，P < 0.01）。

人脂肪干細胞源外泌體具有促進氧化應激損傷的HaCaT細胞遷移的能力。