層析技術(shù)概念、原理、分類（凝膠層析和離子交換層析）

一、概念

利用混和物中各組分理化性質(zhì)（吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數(shù)）的差異，在物質(zhì)經(jīng)過兩相中進(jìn)行分離的一種技術(shù)。

本世紀(jì)初（1903年），俄國(guó)植物學(xué)家M.C.Jber發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素，還含有其他色素，實(shí)際上他使用的吸附層析?，F(xiàn)在層系法已成為生化、分子生物學(xué)及其它學(xué)科領(lǐng)域有效的分離、分析工具之一。

二、原理

可分離物質(zhì)：糖類、有機(jī)酸、氨基酸、核苷酸。

三、分類

1. 按兩相所處物理狀態(tài)分類

氣相層析：氣液層析（固定相為液體）和氣固層析（固定相為固體），流動(dòng)相為氣體。

液相層析：液液層析（固定相為液體）和液固層析（固定相為固體），流動(dòng)相為液體。

2. 按層析方式分類

柱層析：固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿著一個(gè)方向移動(dòng)而分離。

薄層層析：將適當(dāng)粘度的固定相均勻鋪在薄板上，點(diǎn)樣后，用流動(dòng)相展開。

紙層析：用濾紙作液體的載體，點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開。

3. 根據(jù)層析原理分類：常用分類法

（1）吸附層析：固定相是固體吸附劑，通過對(duì)不同溶質(zhì)吸附力強(qiáng)弱不同進(jìn)行分離。

（2）分配層析：利用兩相中的分配系數(shù)不同。

分配系數(shù)：當(dāng)一種溶質(zhì)在兩種給定的互不相溶的溶劑中分配時(shí)，在一定溫度下達(dá)到平衡后，溶質(zhì)在兩相中的濃度比值為一常數(shù)，即分配系數(shù)（Kd）

Kd＝Ca / Cb

Ca和Cb分別代表某一物質(zhì)在互不相溶的兩相，A相（動(dòng)相）和B相（靜相）中的濃度。

（3）離子交換層析：固定相是離子交換劑，各組分與其親和力不同

（4）凝膠層析：固定相是多孔凝膠，根據(jù)流動(dòng)相中溶質(zhì)的分子量大小差異進(jìn)行分離

（5）親和層析：利用固定相載體表面偶聯(lián)具有特殊親和作用的配基，與溶質(zhì)分子發(fā)生可逆的特異性結(jié)合進(jìn)行分離

（6）金屬螯合層析

（7）疏水層析

（8）反相層析

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