碘液顯色法

原理

酶都是蛋白質(zhì)，它的活性受環(huán)境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性，一種酶表現(xiàn)其最高活性時(shí)pH的值，稱為該酶的最適pH。

材料與儀器

淀粉
碘 碘化鉀 磷酸氫二鈉 檸檬酸
試管 吸量管 試管架 吸耳球

步驟

溶液配制：
0.5%淀粉溶液（含0.3%氯化鈉）（新鮮配置），碘-碘化鉀溶液（4 g碘及碘化鉀6 g溶于100 ml蒸餾水中，于棕色瓶中保存），0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液，0.1 mol/L檸檬酸溶液。
1.  樣品收集
漱口后收集唾液,用漏斗加少量脫脂棉過(guò)濾,濾液稀釋100倍備用。
2.  pH對(duì)酶活性的影響
（1）緩沖液的配制

（2）底物的準(zhǔn)備
6支干燥的試管編號(hào)，依次加入不同 pH 的緩沖液各3 ml，第6號(hào)試管與第3號(hào)相同。再向每個(gè)試管中添加0.5%淀粉溶液2 ml，搖勻。
（3）酶促反應(yīng)時(shí)間測(cè)定
向第6號(hào)試管加入稀釋100倍的唾液2 ml，搖勻后放入37 ℃恒溫水浴中保溫。每分鐘取1滴混合液于白瓷板上，加1滴碘化鉀-碘溶液，呈橙黃色時(shí)取出試管，記錄時(shí)間。
（4）最適 pH 測(cè)定
以1 min的間隔，依次向1～5號(hào)試管中加入稀釋200倍的唾液2 ml，搖勻，同樣以1 min間隔，將5只試管放入37 ℃恒溫水浴中保溫，反應(yīng)至所需時(shí)間。依次取出，立即加入碘化鉀-碘液2滴，充分搖勻。觀察顏色，可看出不同pH值時(shí)淀粉被水解的程度，不同pH值對(duì)唾液淀粉酶活性的影響，并確定其最適pH。
3. 溫度對(duì)酶活性的影響
（1）取三支試管按下表操作：

加畢，分別按上述條件繼續(xù)放置10 min。
(2)從三支試管中取出溶液1滴于反應(yīng)板上，加上1滴碘液，觀察呈色現(xiàn)象，記錄結(jié)果并解釋其原因。