薄層層析

原理

硅膠 G 是一種添加了粘合劑的硅膠粉，約含12 %-13 %的石膏，它可以把一些物質(zhì)從溶液中吸附于自身的表面上，利用它對(duì)各種物質(zhì)的吸附能力不同，再用適當(dāng)?shù)娜軇┫到y(tǒng)展層，使不同的物質(zhì)得以分開，使用顯色劑顯色，得到不同的 Rf 值。糖在硅膠 G 薄層上的移動(dòng)速度與糖的分子量和羥基數(shù)有關(guān)，經(jīng)過適當(dāng)?shù)娜軇┱归_后，糖在薄層上的移動(dòng)速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。

材料與儀器

糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 乙酸乙酯 乙酸 氯仿 甲醇 硫酸 二苯胺 苯胺 磷酸 丙酮
多糖
層析缸 硅膠 G 板 毛細(xì)管 烘箱 電吹風(fēng)機(jī) 試管 試管架

步驟

溶液配制：
1 . 糖標(biāo)準(zhǔn)溶液: 木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10 mg/ml 水溶。
2 . 樣品液：多糖的水解液。
3 . 展開劑: ①乙酸乙酯∶乙酸∶水=2∶1∶1；②氯仿∶甲醇=60∶40（V/V）。
4 . 顯色劑: ①25%～50%硫酸；②二苯胺1 g，苯胺1 ml和 85%磷酸5 ml 溶于50 ml 丙酮中。
操作步驟：
1.將硅膠 G 板于100 ℃烘箱活化后冷卻至室溫，用毛細(xì)管點(diǎn)樣，點(diǎn)樣位置為從硅膠板下端1.5 cm，兩側(cè)2～3 cm，每個(gè)樣品點(diǎn)相距1～1.5 cm，斑點(diǎn)直徑2 mm。點(diǎn)一次吹干一次。
2.將展層劑于層析缸中平衡。數(shù)分鐘后，將硅膠板放入。
3.當(dāng)展層劑移至距上端2～3 cm時(shí)，取出硅膠板吹干，均勻噴上顯色劑，于100 ℃顯色。
4.15～30 min后從烘箱取出，測(cè)量 Rf 值。

常見問題

1．薄層層析與其他層析法比較有哪些優(yōu)點(diǎn)?
2．選用展層劑的依據(jù)是什么?
3．糖的顯色劑還有哪些?