細胞化學(xué)法

原理

材料與儀器

組織樣品
DAB MnCl2 Tris CaCl2 KCl NaOH Tris 緩沖液 多聚甲醛 鋨酸

步驟

1. 組織取材后，即放入孵育液中，孵育 5 min。孵育液配方如下：DAB 2.5 mmol/L， MnCl2 0.5 mmol/L，Tris 4 mmol/L，CaCl2 2 mmol/L，KCl 4 mmol/L，pH 7.2～7.4，用 NaOH 調(diào)。

2. Tris 緩沖液漂洗。

3. 4％ 多聚甲醛固定、漂洗。

4. 鋨酸后固定、脫水等同常規(guī)。

注意事項

1. 由于氧自由基化學(xué)性質(zhì)非常活潑，因此組織取材后應(yīng)迅速與孵育液反應(yīng)，孵育后再固定，不能先固定。

2. 關(guān)于鈰生理溶液的配制，由于鈰可與多種物質(zhì)產(chǎn)生沉淀，如磷酸根離子、碳酸根離子，因此配制時需小心，一般可用生理鹽水或葡萄糖等配制。另外，關(guān)于pH問題，雖然反應(yīng)液越接近中性越好，但用三氯化鈰配制時偏酸，而且不能用 NaOH 來調(diào)整，因為會形成沉淀。

3. 動物實驗通常用灌注方法，以便及時與氧自由基反應(yīng)，可取得較為滿意的效果。

4. 孵育液使用前吹氧，實驗較易成功。