S1分析酵母基因寡核苷酸探針

一、操作步驟

1.  在0.5 mL Eppendorf管中混合以下：

10-20 ug 酵母RNA

10 ul 雜交組合

加水，使終體積25 ul

40 ul 礦物油

在100度加熱反應(yīng)2分鐘，轉(zhuǎn)移到55度過夜（12-16小時）雜交（的準確溫度將取決于寡核苷酸的長度和組成）。

2.  培養(yǎng)過夜后，旋管和1.5 ml 離心管中取出水層。添加275 ul S1組合，并培育在37度10-30分鐘。取決于探頭。

3.  6 ul 終止緩沖液+ 900 ul ETOH和執(zhí)行標準的沉淀。洗凈用80%ETOH粒料。重懸在6 ul 甲酰胺測序凝膠上樣緩沖液含有0.1%SDS。加載樣品8%測序凝膠。

二、功能

重要的控制功能有：
一、與沒有核酸激酶探針。
二、含有可變數(shù)量的總RNA的反應(yīng)。信號應(yīng)該是線性的，如果結(jié)果是越來越多的RNA定量。
三、沒有S1的測序凝膠的質(zhì)量和大小的探頭沒有S1的治療觀察治療探頭負載500-1000每千次展示費用。

雜交組合：

1X S1緩沖區(qū)：

4 uM 硫酸鋅

30 mM 醋酸鈉pH 4.6

250 mM 氯化鈉

10 ml 10X S1緩沖區(qū)

0.4 ml 1 M硫酸鋅

3 ml 1 M醋酸鈉

6.25 ml 4 M氯化鈉

0.35 mL 水

S1組合：

27.5 ul 10X S1緩沖區(qū)

2.7 ug 變性鮭魚精子DNA

共85個單位S1核酸酶（GIBCO / BRL）

H2O至最終體積為275 ul/反應(yīng)

停止液：

6 ul 0.25 M EDTA

2 ug 的tRNA（大于10 mg/ml）