糖的硅膠 G 薄層層析實驗

原理

硅膠 G 是一種添加了粘合劑的硅膠粉，約含12 %-13 %的石膏，它可以把一些物質從溶液中吸附于自身的表面上，利用它對各種物質的吸附能力不同，再用適當的溶劑系統展層，使不同的物質得以分開，使用顯色劑顯色，得到不同的 Rf 值。糖在硅膠 G 薄層上的移動速度與糖的分子量和羥基數有關，經過適當的溶劑展開后，糖在薄層上的移動速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。

材料與儀器

糖標準溶液 乙酸乙酯 乙酸 氯仿 甲醇 硫酸 二苯胺 苯胺 磷酸 丙酮
多糖
層析缸 硅膠 G 板 毛細管 烘箱 電吹風機 試管 試管架

步驟

溶液配制：
1 . 糖標準溶液: 木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10 mg/ml 水溶。
2 . 樣品液：多糖的水解液。
3 . 展開劑: ①乙酸乙酯∶乙酸∶水=2∶1∶1；②氯仿∶甲醇=60∶40（V/V）。
4 . 顯色劑: ①25%～50%硫酸；②二苯胺1 g，苯胺1 ml和 85%磷酸5 ml 溶于50 ml 丙酮中。
操作步驟：
1.將硅膠 G 板于100 ℃烘箱活化后冷卻至室溫，用毛細管點樣，點樣位置為從硅膠板下端1.5 cm，兩側2～3 cm，每個樣品點相距1～1.5 cm，斑點直徑2 mm。點一次吹干一次。
2.將展層劑于層析缸中平衡。數分鐘后，將硅膠板放入。
3.當展層劑移至距上端2～3 cm時，取出硅膠板吹干，均勻噴上顯色劑，于100 ℃顯色。
4.15～30 min后從烘箱取出，測量 Rf 值。

常見問題

1．薄層層析與其他層析法比較有哪些優點?
2．選用展層劑的依據是什么?
3．糖的顯色劑還有哪些?