鋰－匹羅卡品大鼠癲病模型制作實驗

原理

癲癇(epilepsy)是最常見的神經系統疾病之一。其特征是反復性驚厥發作，伴隨不同的臨床和腦電圖表現。動物實驗是研究人類癲病發病機制最主要的手段，目前已有數十種動物模型應用于癲癇研究，根據產生的方式分為遺傳性和人工誘發性。選擇動物模型取決于所需解決的問題、癲寐類型及研究目的。本節主要介紹錐－匹羅卡品點燃大鼠癲病模型，該模型由Honchar等于1983年首次報道。其具有同人類癲病持續狀態(status epilepticus,SE)或顳葉癲癇相似的特征表現，適用于探討顳葉癲癇形成機制及篩選抗癲癇藥物，用于SE及復雜部分性發作的分子生物學和電生理等多方面研究。模型制作機理為：乙酰膽堿(ACh)在癲癇的發生中發揮著重要作用，ACh受體激動劑匹羅卡品全身給藥可引起癲癇發作；氯化鋰可有效提高機體對匹羅卡品的敏感性，使匹羅卡品的用量減少，顯著降低因匹羅卡品毒性作用所造成的動物死亡率；溴甲基東莨菪堿主要用于減輕匹羅卡品引發的周圍神經系統反應（血淚、流涎等）。

材料與儀器

成年SD大鼠(200-250g)
氯化鋰 匹羅卡品 溴甲基東莨菪堿 苯巴比妥鈉注射液 0.9%生理鹽水
注射器

步驟

1.按照預計實驗動物數估算所需各種藥品的總需要量，分別稱取總需要量的溴甲基東莨菪堿、氯化鋰和匹羅卡品，用0.9%生理鹽水（需過濾）將實驗藥品溶解為工作濃度。

2建模前1d,氯化鋰3mmol/kg腹腔注射。

3.氯化鋰注射后18-20h,皮下注射溴甲基東莨菪堿1mg/kg,并記錄給藥時間。

4.30min后給予首劑匹羅卡品30mg/kg腹腔注射，觀察大鼠癲癇樣發作程度。此后每隔30min給予10mg/kg追加劑量腹腔注射，直至出現Ⅳ級以上無明顯間歇的SE樣發作（見結果判讀）。極量為60mg/kg。

5.SE后1h,注射苯巴比妥鈉40mg/kg終止發作。

6.注射苯巴比妥鈉30min后給予皮下注射生理鹽水10ml,用以補充建模過程中所致的體液損失。

7.結果判讀:

（1）模型分級標準：大鼠癲病發作癥狀采用Racine分級標準：

①0級無任何反應；②Ⅰ級面部陣攣，包括眨眼、動須、節奏性咀嚼等；③Ⅱ級：Ⅰ級加節律性點頭；④Ⅲ級：Ⅱ級加前肢肌陣攣，但無后肢直立位；⑤Ⅳ級：Ⅲ級加后肢直立位；⑥Ⅴ級全面性強直－陣攣發作，并失去體位控制。實驗動物出現連續1h的Ⅳ級及以上程度發作，可判定為建模成功。:

（2）癲病模型分期：本癲癇模型在時間上主要分為三個時期：

①急性期Pilocar-pine注射后幾分鐘至1h內發生并持續約24h的SE狀態，此狀態以強直－陣攣全身性發作為特征；

②潛伏期在SE之后，發作得到緩和，幾乎沒有癲病發作，又稱為沉默期，可持續1周至數周；

③慢性癲癇期 在潛伏期之后，以反復性自發癲癇發作(SRSs)為特征，平均每周發作2-3次。腦電圖表現：①急性期可見海馬區出現顯著的0節律和皮層的低壓快速電活動，并在海馬發展成為帶有棘波的高壓快速電活動；②在潛伏期顯示出正常的EEG活動；③慢性期，初始的SRSs常以無皮層記錄改變的陣發性海馬發放為特征，其后逐步演變為分級的皮層、海馬同步化發放。

注意事項

1.匹羅卡品需在建模前新鮮配制，使用過程中避光存放，以確保藥效。

2.小鼠程序同大鼠，所選動物體重范圍20-25g。以C57BL/6小鼠為例，建模藥物劑量為氯化鋰10mmol/kg,匹羅卡品100mg/kg。

3.若匹羅卡品注射已達極最，大鼠仍未出現Ⅳ級及以上程度發作，則可認為建模失敗。

常見問題

1.建模過程中，若見大鼠出現間斷性IV級發作，伴有持續的Ⅲ級發作，且發作過程中無明確的自主爬行及摸索動作，也可判定為符合模型標準。

2.筆者曾在大鼠出現Ⅲ級發作時及時應用苯巴比妥鈉終止發作，建立輕度癲病發作模型,組織學染色證實大鼠海馬區出現不同于SE后的病理學改變。

3.大鼠在建模成功后1周內因頻繁癲癇發作，死亡率較高。可每天給予5%葡萄糖氯化鈉3-5ml腹腔注射，2/d,加強能量供給。