可用于各種羧基的親和配基(蛋白質、多肽、糖)的氨基活化偶聯介質(EAH-activated)

氨基活化偶聯介質可用于各種含有羧基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯，廣泛廣泛。EAH-activated QZT4FF活化偶聯介質以高流速瓊脂糖凝膠為基質，經過一系列的活化步驟，最終形成活化氨基，在溫和的條件下就可以偶聯各種帶羧基的配基。EAH-activated QZT4FF活化介質具有使用方便、偶聯條件溫和、偶聯效率高和應用范圍廣的特點。

氨基活化介質的理化性質和產品特性如表1所示。

氨基活化偶聯介質(EAH-activated)的應用

EAH-activated活化偶聯介質廣泛用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯。具體的操作步驟如下（以4 ml活化膠偶聯BSA為例）：

（1）將約4 ml EAH活化膠水洗3-5次后抽干，再用pH 4.5的稀HCl溶液清洗2次，抽干后將4 ml EAH活化膠（約3.0 g）加入到10 ml的反應器（磨口三角瓶或離心管）中，備用。

（2）準確稱取40 mg BSA溶于4.0 ml稀HCl，pH 4.5溶液，溶解完全后加入84 mg EDC.HCl，溶解完全后測量其pH是否為4.5，否則需調到4.5，備用。

（3）將BSA溶液加入到活化膠中，反應溫度恒定在4℃或25℃，搖床中振蕩混合（離心管水平放置），轉速120 rpm，反應時間24 h（反應前1小時pH有明顯的下降，可在15、30、45、60 min時測量pH并加入適量0.1M NaOH調pH至4.5）。

（4）反應停止后，靜置，取上清離心（1000 g，5 min，室溫），收集上清液用于未偶聯BSA的濃度分析，計算偶聯的BSA的配基密度；將其余料液轉移到G3砂芯漏斗中用去離子水清洗、抽干。

（5）封閉未反應的EAH：一般不需要封閉，如需封閉未反應的氨基，可在偶聯反應后（注意是在清洗前）直接往反應物中加入4.2 ml 1 M 乙酸（醋酸），繼續反應4 h。反應停止后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干，用去離子水清洗。

（6）清洗

將制得的BSA瓊脂糖凝膠依次用5倍的去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 4.0）、去離子水、0.1M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液（pH 8.0）和去離子水充分洗滌（重復清洗3次），抽干，去除未反應的配基。

（7）保存

制得的BSA親和介質保存于4℃、20%乙醇溶液中。

備注：其他配基的偶聯方法與BSA類似，但反應條件（溫度（4 oC至室溫）、時間（4-24 h）、配基加入量）需要根據配基的特性和應用的需求進行適當調整。

注意事項：通常用稀鹽酸作為偶聯溶液，如果選用緩沖液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的緩沖液。