粗脂肪含量的測定
一、目的
脂肪廣泛存在于許多植物 的種子和果實中，測定脂肪的含量，可以作為鑒別其品質優劣的一個指標。脂肪含量的測定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、電測和核磁共振法等。目前國內外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公認的經典方法，也是我國糧油分折首選的標準方法。通過本實驗的學習,掌握索氏抽提法測定粗脂肪含量的原理和操作方法。
二、原 理
本實驗采用索氏抽提法中的殘余法，即用低沸點有機溶劑（乙醚或石油醚）回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘渣重量之差，計算粗脂肪含量。由于有機溶劑的抽提物中除脂肪外，還或多或少含有游離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂物質，因而抽提法測定的結果只能是粗脂肪。
三、實驗材料、主要儀器和試劑
1．實驗材料
油料作物種 子、中速濾紙
2．儀器：
（1）索氏脂肪抽提器或YG-Ⅱ型油分測定器
（2）干燥器(直徑15～18cm，盛變色硅膠)
（3）不銹鋼鑷子（長20cm）
（4）培養皿
（5）分析天平（感量0.001g）
（6）稱量瓶
（7）恒溫水浴
（8）烘箱
（9）樣品篩（60 目）
3．試劑
無水乙醚或低沸點石油醚（A.R.）
四、操作步驟
1．將濾紙切成8cm×8cm，疊成一邊不封口的紙包，用硬鉛筆編寫順序號，按順序排列在培養皿中。將盛有濾紙包的培養皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷卻至室溫。按順序將各濾紙包放人同一稱量瓶中稱重（記作a）、稱量時室內相對濕度必須低于70％。
2．包裝和干燥
在上述已稱重的濾紙包中裝入3g 左右研細的樣品，封好包口，放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷卻至室溫。按順序號依次放入稱量瓶中稱重（記作b）。
3．抽提
將裝有樣品的濾紙包用長鑷子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67 倍的無水乙醚，使樣品包完全浸沒在乙醚中。連接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒溫水浴中進行抽提，調節水溫在70～80℃之間，使冷凝下滴的乙醚成連珠狀（120～150 滴/min 或回流7次/h 以上），抽提至抽取筒內的乙醚用濾紙點滴檢查無油跡為止（約需6～12h）。抽提完畢后，用長鑷子取出濾紙包，在通風處使乙醚揮發（抽提室溫以12～25℃為宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。
4．稱重
待乙醚揮發之后，將濾紙包置于105±2℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷卻至恒重為止（記作c）。
五、結果與計算
式中：a：稱量瓶加濾紙包重（g）
b：稱量瓶加濾紙包和烘干樣重（g）
c：稱量瓶加濾紙包和抽提后烘干殘渣重（g）
六、附 注
（1）測定用樣品、抽提器、抽提用有機溶劑都需要進行脫水處理。這是因為：
第一，抽提體系中有水，會使樣品中的水溶性物質溶出，導致測定結果偏高；
第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2％的水），從而影響抽提效率；
第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細胞組織內部，結果不易將脂肪抽提干凈。
（2）試樣粗細度要適宜。試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過細，則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測定結果。
（3）索氏抽提法測定脂肪最大的不足是耗時過長，如能將樣品先回流1～2 次，然后浸泡在溶劑中過夜，次日再繼續抽提，則可明顯縮短抽提時間。
（4）YG-Ⅱ型油分測定器容量大，適合于樣品較多的選種鑒定工作使用，溫度控制在70℃左右，8h 可提取完畢。
（5）必須十分注意乙醚的安全使用。抽提室內嚴禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過氧化物，保持抽提室內良好通風，以防燃爆。
乙醚中過氧化物的檢查方法是：取適量乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動，放置1min，若出現黃色則表明存在過氧化物，應進行處理后方可使用。
處理的方法是：將乙醚放入分液漏斗，先以1/5 乙醚量的稀KOH溶液洗滌2～3 次，以除去乙醇；然后用鹽酸酸化，加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液，振搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過氧化物；最后用水洗至中性，用無水CaCl2 或無水Na2SO4 脫水，并進行重蒸餾。
七、思考題
1．如何利用殘余法測定油料作物種 子中的粗脂肪含量？
2．測定過程中為什么需要對樣品、抽提器、抽提用有機溶劑都要進行脫水處理？
3．在實驗過程中安全使用乙醚應注意哪些問題？
4．測定樣品粒子粗細有什么要求？
參考答案
1．殘余法測定油料作物種 子中的粗脂肪含量，是用低沸點有機溶劑（乙醚或石油醚）回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘渣重量之差，來計算粗脂肪含量。
2．進行脫水處理的原因有三：第一，抽提體系中有水，會使樣品中的水溶性物質溶出，導致測定結果偏高；第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2％的水），從而影響抽提效率；第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細胞組織內部，結果不易將脂肪抽提干凈。
3．抽提室內嚴禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過氧化物，保持抽提室內良好通風，以防燃爆。
4．試樣粗細度要適宜。試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過細，則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測定結果。
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