骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
材料與儀器
肌組織
Hanks 胰蛋白酶 血清 胎汁
紗布
步驟
動物胚或幼體的大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠(Wistar 大鼠更好)。
1. 殺死動物,無菌取大腿肌組織,切成0.3~0.5 厘米小塊;
2. 用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消化,無菌紗網(wǎng)或紗布濾過,合成培養(yǎng)基加10 %小牛(或馬)血清培養(yǎng),為促進(jìn)分分蘗節(jié)經(jīng)可加1 %的胎汁;
3. 細(xì)胞接各量為2×106 /皿;接種在膠原或明膠的底物上能促進(jìn)細(xì)胞分化。明膠制備比較簡單,常用Hanks液配的0.01 %明膠。
細(xì)胞接種率約為50 %;細(xì)胞生長開始呈紡錘形,培養(yǎng)50~52 小時后將出現(xiàn)融合形成肌細(xì)胞狀多核纖維。數(shù)日后融合停止,此時能觀察到橫紋。一般在融合后二三天內(nèi)能見到收縮現(xiàn)象;因收縮運(yùn)動有時可導(dǎo)致細(xì)胞從底物脫離。在初代培養(yǎng)時,如發(fā)現(xiàn)成肌細(xì)胞(Myoblast)所占比例很少時,根據(jù)成肌細(xì)胞比非成肌細(xì)胞貼壁慢的特點(diǎn),可采用胰蛋白酶消化后反復(fù)貼壁法,淘汰掉非肌細(xì)胞成分。骨骼肌細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng),使之成為有限細(xì)胞系;但易失去分化現(xiàn)象;表現(xiàn)為成肌細(xì)胞不發(fā)生融合,從而不能形成多核肌纖維和出現(xiàn)收縮現(xiàn)象,只有培養(yǎng)條件良好時,才可發(fā)生肌細(xì)胞收縮變化。