Caspase激活的比色計定量

材料與儀器

細胞
PBS Eppendorf DMSO
微量滴定板

步驟

1. 250 g 離心 5 分鐘收集 2X106~5X106 細胞，用 pH 7.2 的冷 PBS 洗 1 次，用 200 μl 溶解緩沖液重懸。

2. 在冰上孵育細胞 30 分鐘。

3. 用 Eppendorf 將樣品在 13000 r/min 離心 5 分鐘，取上樣進行 Caspase 活性測定：每種樣品留一等份作蛋白質定量。

4. 在水或 DMSO 中溶解底物，配置成 20 mmol/L 的儲存液，可在 -20℃ 避光保存。

5. 將反應混合液置微量滴定板中，用帶動力學裝置的 SpectraMax 微量滴定板分析儀在 405 nm 濾光片下讀取反應數據。每 2~20 秒檢測樣品，確定底物的初始水解率；保證所得底物水解率為線性。