甲醛滴定法測氨基氮
一、目的
初步掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點。
二、原理
水溶液中的氨基酸為兩性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。用甲醛處理氨基酸，甲醛與氨基結(jié)合，可形成—NH—CH 2 0H，—N(CH 2 －0H) 2 等羥甲基衍生物，使NH 3+ 放出的H ＋ 游離出來，這樣就可用堿滴定放出的H ＋ ，測定氨基氮，從而計算出氨基酸的含量。
若樣品中只含某一種已知氨基酸，由甲醛滴定的結(jié)果可算出氨基酸的量。若樣品是多種氨基酸的混合物〈如蛋白水解液〉，則滴定結(jié)果不能作氨基酸滴定量的依據(jù)。一般常用此法測定蛋由質(zhì)水解程度，水解程度的增加滴定值增大，當水解完全后，滴定值保持平衡。但脯氨酸與甲醛作用生成不穩(wěn)定化合物，致使滴定結(jié)果偏低；脯氨酸的酚基結(jié)構(gòu)又可使滴定結(jié)果偏高。
三、器材
1、錐形瓶
2、25 ml堿式滴定管
3、移液管
四、 試劑
1．0.5%酚酞酒精溶液
0.5g酚酞溶于100mL60%乙醇中
2．0.05%溴麝香草酚藍溶液
0.05g溴麝香草酚藍溶于100mL20%乙醇溶液中
3．1％甘氨酸溶液
1g甘氨酸溶于100rnl 蒸餾 水
4．標準0.100mol/LNaOH溶液，可采用0.100mol/L標準HCl溶液標
5．中性甲醛溶液
50ml甲醛溶液，加約3ml0.5%酚酞指示劑，滴加o.1mol/LNaOH溶液，使溶液成微粉紅色，臨用前配制。
五、操作
取3只錐形瓶，編以1、2、3號。于1、2號瓶中各加甘氨酸溶液2.0ml及水5.0ml；
于3號瓶中加水7.0ml。然后3只錐形瓶中各加入甲醛溶液5.0ml,0.05%溴麝香草酚藍溶
液兩滴及0.5%酚酞酒精溶液4滴。再用標準0.1mol/LNaOH溶液，滴定至紫色(pH0.7-9.0)。則每ml 氨基酸 溶液中含氨基氮的mg數(shù)為：
注：A——滴定樣品消耗NaOH溶液的ml數(shù)
B——滴定空白消耗NaOH溶液的ml數(shù)
1.4008——1ml0.1mol/LNaOH溶液相當?shù)牡猰g
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