a一醋酸萘酯酶（ANAE)染色法步驟
問：誰有a一醋酸萘酯酶（ANAE)染色法的具體步驟，我們這里查不到，還望各位大俠不吝賜教！
答：中性非特異性脂酶(α—NAE)染色
[方法學]
酯酶染色的方法很多，根據與pH底物等不同作用，將常用的酯酶染色法分為兩大類，即特異性酯酶染色和非特異性酯酶染色。
后者又可分為3類：
①中性非特異性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。
②酸性非特異性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。
②堿性非特異性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。中性非特異性酯酶染色是單核細胞與粒細胞白血病區別的重要方法，一般實驗室可選用此法。
[原理]
α—乙酸萘酚經酯酶水解產生萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞漿中。
[試劑]
1、α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸餾水混合液100m1，溶解后貯于磨口帶塞三角瓶內，4℃保存，可使用半年。
2、pH7．4磷酸鹽緩沖液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)
3、基質液：磷酸鹽緩沖液82ml，緩慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速約每分鐘40滴)，邊加邊用力振搖。根據5分鐘后，加堅牢藍B80mg，劇烈振搖10分鐘，立即過濾，濾液兩杯，各40ml。
4、氟化鈉基質液：稱取氟化鈉(NaF)61mg加入上述其中基質液1杯內，混勻后，標上標記。
[操作]
(1)新鮮涂片兩張，分別標上NSE和NaF記號，滴加10％甲醛生理鹽水，固定5分鐘，用自來水輕輕沖洗，當心血膜脫落，晾干。
(2)兩張涂片同時放入各自染色杯內，37℃水浴1小時。
(3)取出后水洗，晾干后鏡檢。不用復染。
[結果觀察]
在胞漿內若有棕黑色或灰黑色彌漫性顆粒沉淀者為陽性，細胞腦漿為黃色者為陰性。
[臨床意義]
1、陽性：單核細胞和組織細胞呈強陽性，但可被氟化鈉抑制；巨核細胞及血小板呈陽性；早幼粒細胞白血病時早幼粒細胞可陽性，且不受氟化鈉抑制。
2、弱陽性及陰性：粒細胞、淋巴細胞一般為陰性，若有弱陽性也可被氟化鈉抑制。
3、臨床鑒別：主要用于鑒別急性單核細胞性白血病與急性粒細胞性白血病，前者NSE陽性，且受氟化鈉(NaF)抑制；而后者NSE陰性，若有陽性也不受氟化鈉抑制。
[附注]
(1) 堅牢藍B和氟化鈉可小包分裝后干燥器保存
(2) 基質液配制過程中要振搖，以促使基質溶解。冬天配制時應適當加溫(置于37℃水箱操作)。基質液現配現用，不能保存，過濾后應盡快試驗，以免大量沉淀物析出，影響染色效果。
北京天優福康生物科技有限公司
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
