噬菌體的一步生長曲線
在微生物筆記--初識噬菌體一文中初步認識了噬菌體,其中能夠在短時間內完成吸附、侵入、增殖、成熟和裂解5個階段的噬菌體是烈性噬菌體。為定量描述烈性噬菌體的生長規律,可以用一步生長曲線來表示。
一步生長曲線又稱為一級生長曲線(one-step growth curve),可以分為3個階段:潛伏期(latent phase)、裂解期(rise phase)和平穩期(plateau):
潛伏期:此階段是當噬菌體的核酸侵入宿主細胞后至第一個成熟子代噬菌體釋放前的一段時間。此階段又可以分為2個時期:第一個時期是隱晦期(eclipse phase),此時期宿主細胞內主要進行核酸的復制和蛋白質合成,如果人為裂解細胞,獲得的裂解液沒有侵染性;第二個時期是胞內累積期(intracellul araccumulate phase),這個時期的宿主細胞內已經在進行子代噬菌體的裝配,如果人為裂解細胞,獲得的裂解液是具有侵染性的。
裂解期:此階段是緊接在潛伏期后,子代噬菌體已經成熟和急劇增多,能夠將宿主細胞迅速裂解的一段時間。此階段在理論上是一瞬間出現的,但因為在宿主細胞群體中每個宿主細胞的裂解過程存在不同,所以裂解期會比較長。
平穩期:此階段是宿主細胞已經被完成裂解的時期,其主要特點是溶液中噬菌體的效價達到最高值。
一步生長曲線的基本實驗步驟如下:
噬菌體的稀釋液去感染高濃度的宿主細胞,以保證每個細胞所吸附的噬菌體至多只有1個;
經過數分鐘的吸附后,在混合液中加入適量的相應抗血清,以中和未吸附的噬菌體;
用保溫的培養液稀釋上述混合液,并終止抗血清的作用,然后放置適宜條件下培養;
在培養期間設置取樣時間,在取樣時間取樣并測定其效價,根據結果繪制成一步生長曲線。