如何在污染的枯草芽孢桿菌中篩選高產淀粉酶的枯草芽孢桿菌?
篩選原理
芽孢具有較強的抗高熱的能力,利用枯草芽孢桿菌的芽孢耐熱特性,使用熱處理的方式進行分離純化:在高溫加熱的條件下,能夠殺死受污染枯草芽孢桿菌中不能產生芽孢的其它菌類,使得芽孢菌在培養過程中得以富集。另外,利用高產淀粉酶的特性,選擇以淀粉為主要碳源的培養基:淀粉酶的水解作用能夠使得菌落周圍形成明顯的透明圈,通過比較透明圈的直徑C與菌落直徑H的比值,初步鑒定產酶的活力,即比值越大,酶活力越高,進而篩選出高產淀粉酶的枯草芽孢桿菌。
方法步驟
準備250 ml的牛肉膏蛋白胨培養基,取5 ml的樣品接入培養基中,放置于80-90℃水浴中,加熱10-15分鐘,記錄處理時間。接著將其放置于30℃的搖床中培養24小時。培養完成后,進行鏡檢。根據鏡檢結果,將培養液以10倍梯度稀釋法進行適當稀釋,將連續3個稀釋梯度的稀釋液取1 ml,接入無菌平板中,每個稀釋梯度至少2個重復。緊接著將融化的淀粉瓊脂培養基傾注至平板中(培養基溫度應冷卻至50℃左右進行此操作),輕輕混勻,待凝固后放置于30℃培養箱培養24-48小時,挑取單菌落。使用0.02 mol/L碘液滴加在淀粉平板中的菌落周圍,觀察透明圈形成的結果,將C/H比值大的菌落接入斜面培養基中,培養備用。為確保篩選得到菌株為純種,可從細胞形態、染色、血清學、質譜或測序的方法進行鑒定。
總結
以上是從受到污染的枯草芽孢桿菌中篩選高產淀粉酶的枯草芽孢桿菌的基本過程。可以發現,在微生物篩選中,首先需要明確樣品的特性和篩選的目標,這樣才能選擇合適的方法獲得目的菌株。