一、實驗原理

平板菌落計數法是根據微生物在固體培養基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的現象進行的，也就是說一個菌落即代表一個單細胞。 

計數時，先將待測樣品作一系列稀釋，再取一定量的稀釋菌液接種到培養皿中，使其均勻分布于平皿中的培養基內，經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可換算出樣品中的含菌數。 

此法優點是能測出樣品中的活菌數，但手續繁瑣，測定值常受各種因素影響。

二、實驗器材

待測菌液、培養基、涂布器、無菌水、酒精燈等。

三、實驗步驟

1、 制備培養基

（1） 根據培養不同細菌選擇不同培養基，高溫滅菌后冷卻至 50 ℃左右倒入無菌培養皿中，充分冷卻待平板稍干后才可使用。 

（2）每一平板傾倒約 15mL 培養基，培養基應厚薄均勻，平板表面應光滑。 

倒平板方法：右手持盛培養基的錐形瓶置火焰旁邊，瓶口保持對著火焰；左手拿無菌培養皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速倒入培養基約 15 mL，加蓋后輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。

2、 樣品稀釋液的制備

（1）吸取原菌液到裝有 90 mL 無菌水并放有小玻璃珠的 250 mL 三角瓶中，用手或置搖床上振蕩，使微生物細胞分散，靜置 20–30 s，即成 10?1 稀釋液； 

（2） 再用 1 mL 無菌吸管，吸取 1 mL 10?1 稀釋液，移入裝有 9 mL 無菌水的試管中，吹吸 3 次，讓菌液混合均勻，即成 10?2 稀釋液； 

（3） 以此類推，連續稀釋，制成 10?3、10??、10??、10??、10??、10?? 等一系列稀釋菌液。 

注意：

精確吸取 0.1 mL 10??、10??、10?? 稀釋菌液，放入對應的無菌培養皿中，進行涂布。 

4、 恒溫培養

將平板倒置，于適溫下培養，一般細菌培養 48 h 后，對菌落進行計數。

5、 計數規則

（1） 可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量； 

（2）  選取菌落數在 30–300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數； 

（3）  低于 30 CFU 的平板記錄具體菌落數，大于 300 CFU 的可記錄為“多不可計”； 

（4）  每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。