Oasis HLB凈化和ACQUITY UPLC/TQD快速分析動物性食品中糖皮質類激素興奮劑的含量
概要：
本文應用沃特世（Waters?）Oasis?HLB固相提取技術和ACQUITY UPLC? 超高效液相色譜/TQD串聯四極桿質譜系統測定分析動物性食品中糖皮質類激素興奮劑。
前言
糖皮質激素（Glucocorticoids）的化學結構屬于類固醇類化合物，具有調節糖代謝，促進蛋白轉化為糖，提升血糖濃度，抗炎癥、抗過敏作用，調節水鹽代謝等作用。從體外大量攝入糖皮質類激素會造成體內激素比例失調，糖代謝和無機鹽代謝紊亂；
長期大量使用糖皮質類激素還會誘發或加重感染，出現心血管系統并發癥、骨質疏松、肌肉萎縮、傷口愈合遲緩以及出現消化系統并發癥，例如使胃酸、胃蛋白酶分泌增加，抑制胃粘液分泌，降低胃腸粘膜的抵抗力，甚至造成消化道出血或穿孔。
糖皮質類激素對人體健康除了具有很多副作用外，也會影響運動員參加比賽時的身體狀態，違背了體育比賽公平競爭的原則，所以此類藥物屬于國際奧委會宣布禁用合成類固醇類興奮劑。
近年來在一些供運動動員食用的保健類食品、營養補充劑及部分動物性食品中檢出含有糖皮質類激素類的事件屢有發生，由于誤食此類被污染的食品，使很多運動員出現不必要的陽性結果。
2008年北京奧運會除對參賽運動員進行嚴格的興奮劑檢測外，同樣要對供運動員食用的各類食品進行嚴格的監測。本文采用沃特世HLB固相提取凈化技術和UPLC?/TQD系統建立動物性食品中糖皮質類激素的快速、高通量篩查及確證技術，為此類食品的興奮劑監測提供了全方案的技術支持。
實驗方法
1.1 試劑和材料
20孔真空提取裝置，旋轉蒸發儀，Oasis HLB（500mg，6cc）：乙腈，甲醇，甲酸，乙酸乙酯均為色譜純，實驗用水為超純水，無水硫酸鈉。糖皮質類激素標準品：潑尼松，潑尼松龍，氫化可的松，可的松，甲基潑尼松，倍他米松，地塞米松，倍氯米松，氟氫可的松，純度≥98%。
2.1 分析條件
液相色譜條件
LC系統：沃特世ACQUITY UPLC
色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18，2.1mm×50mm，1.7μm
柱溫：30℃
流速： 500μL/min
流動相A：水
流動相B：乙腈
梯度： 時間0 min 20%B
時間5 min 25%B
時間5.3 min 50%B
時間5.5 min 60%B
時間5.6 min 20%B
時間6.5 min 20%B
總分析時間6.5 min
進樣量：10 μL
質譜條件
質譜系統：沃特世ACQUITY? TQD檢測器
電離模式：ESI(-)
毛細管電壓：2.8 kV
去溶劑氣溫度：400℃
去溶劑流速：800 L/h
離子源溫度：130℃
數據采集：多反應監測（MRM）
碰撞氣體： 氬氣3.2×10-3 mba
調節ACQUITY TQD使得母離子和子離子在半峰寬的分辨率為0.7 Da以內。 本實驗的多反應監測(MRM)、駐留時間、錐孔電壓和碰撞能量列表參見表1。標注下劃線的離子對用于定量分析。
數據采集和處理方法
沃特世公司Mass Lyn x?4.1操作軟件用于數據采集，TargetLynx?應用管理軟件用于數據處理。
3.1 樣品前處理
稱取5g的處理均勻的豬肉樣品，依次加入10g無水硫酸鈉，20mL乙酸乙酯，混合均勻后均質1min，振蕩提取10min，在10000 轉/min下離心5min。上清液轉移至濃縮瓶中，再向殘渣中加入10mL乙酸乙酯重復上述操作一次，合并兩次提取液，在40℃下旋轉蒸發至干。
濃縮后樣品用5mL 30%甲醇水溶液溶解。Oasis HLB預先依次用3mL甲醇，6mL水活化。將上述提取液全部通過柱，依次用5 mL水，5mL 50%甲醇水溶液淋洗后抽干。用10mL甲醇/乙腈（1: 1）洗脫并接收，洗脫液在40℃下氮氣吹干后，用乙腈/水（2: 8）溶解定容至1mL，過0.2μm濾膜后上機分析測定。
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