瓊脂凝膠電泳
在凝膠電泳中,瓊脂凝膠電泳是最早得到廣泛應用的。因為它具有下列 優點:
①在瓊脂凝膠中含有瓊脂1%~1.5%,其余都是水,在這種凝膠中電泳, 近似自由界面電泳,可是樣品擴散又比自由界面電泳小;
②瓊脂凝膠電泳支 持物均勻,電泳區帶整齊,分辨率高,重復性好;
③液相與固相界面無明顯 界限,電泳速度快;
④瓊脂凝膠透明而不吸收紫外線,可以直接用紫外檢測 儀測定;
⑤區帶容易染色,樣品容易洗脫,利于制備;
⑥干膜可以長期保存。 除以上的優點外,瓊脂凝膠電泳也有它的不足之處,因為瓊脂是一種強 酸性物質,能造成嚴重的電滲現象,影響電泳的速度,而且瓊脂所含可溶性 雜質難于除去。
瓊脂凝膠電泳肺癆板式和柱式兩種,一般采用平板式。其實驗步驟如下:
1、配置緩沖溶液瓊脂凝膠電泳常用緩沖溶液的pH 值多在6~9 之間, 離子強度為0.02~0.05。離子強度過高時,由于大量電流通過瓊脂板將產生 熱量,使板中水分大量蒸發而析出鹽的結晶,甚至使用瓊脂板斷裂,電流中 斷。常用的緩沖溶液,有硼酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液。
2、制板制板常用的瓊脂濃度為1%~1.5%。因為用這個濃度制成的凝 膠富有彈性、堅固不脆。將一定兩的瓊脂用 水浴 加熱熔化,趁熱與等體積預 熱至60℃的緩沖液混合,使其濃度為1%~1.5%,繼續加熱至表面無氣泡, 迅速將凝膠倒在水平玻璃板上,使其厚度約為3mm,冷卻后即成瓊脂板(注 意這里所用緩沖液的離子強度必須比電泳時的離子強度高1 倍)。
3、點樣加樣方法二:一是挖槽法,在瓊脂板的中央挖一長方形小槽, 將在 水浴 上熔化至42~45℃的瓊脂與樣品等量混合,倒入小槽中,也可直接 將樣品倒入小槽中;另一種是濾紙插入法,在瓊脂板上適當的位置用刀片切 一裂縫,插入蘸有樣品的厚濾紙片,紙片的寬度與瓊脂板厚度一致。樣品濃 度一般以4%~5%為宜。
4、電泳加樣完畢后,將瓊脂板輕輕放在電泳槽上,兩端用幾層濾紙 與電極槽緩沖液連接。接通電源,調節電壓。一般電場強度為6V/cm。
5、固定和染色將電泳后的瓊脂板浸入70%酒精配制的2%醋酸溶液 中15~20 分鐘進行固定。固定后的瓊脂板,需用自上而下為水漂洗數次,然 后放在40℃左右的 烘箱 中烘干,這時 瓊脂 板成一薄膜,附于玻璃板上,再 以適當的顯色劑顯色。
北京天優福康生物科技有限公司
官網:http://m.jyzjsd.com/
服務熱線:400-860-6160
聯系電話/微信:13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail:Tianyoubzwz@163.com