地高辛(DIG)產品選擇指南——選擇合適的標記
如果您有足夠量的高純度模板,建議您采用隨機引物標記方法的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I 和II。這兩個試劑盒包含了標記、封閉、雜交和檢測所需要的所有試劑,是真正意義上的一站式服務的試劑盒。二者之間的差別在于檢測方法的不同:Starter Kit I采用了顯色法,使用顯色底物 NBT/BCIP;而Starter Kit II選用化學發光法底物CSPD。
如果您用來合成探針的DNA模板的量比較少或是質量不夠高的時候,建議您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。該試劑盒專用于制備高靈敏度的雜交探針,例如單拷貝的基因。其另一個特點就是實驗中無需定量斑點檢測過程,通過定量凝膠電泳就可以快速確定PCR標記探針的效率。
用缺口平移法標記的DNA探針,可以控制探針長度,一般多用于原位雜交。
標記RNA探針
在Northern blot中即可以使用DNA探針,也可以使用RNA探針。通常,RNA探針的特異性和靈敏度都會更高一些;當然如果對靈敏度和特異性沒有特別嚴格的要求的話,DNA探針會更方便操作。
如果您需要制備RNA探針的話,推薦您使用Northern Starter Kit。該試劑盒以線性的DNA為模板,通過SP6, T7或是T3 RNA聚合酶的作用將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,借助化學發光底物CDP-Star檢測。另一個產品DIG RNA Labeling Kit也可用于RNA探針的標記。
末端標記寡核苷酸Oligonucleotide
如果您的探針模板非常短,量也比較少,您可以選擇末端標記法標記寡核苷酸探針。
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