生物氧化與電子傳遞
目的要求
1. 掌握電子在電子傳遞鏈中的傳遞過程；
2. 了解體外實驗中研究電子傳遞鏈的方法。
原 理
生物氧化過程中代謝物脫下的氫由NAD+ 或FAD接受生成還原型NADH或FADH2，再經一系列電子傳遞體傳遞，最后與氧結合生成水。這些存在于線粒體 內膜上的氧化還原酶及其輔酶依次排列，順序地起傳遞電子或電子和質子的作用，稱為電子傳遞鏈或呼吸鏈。
在體內，代謝中間產物琥珀酸在線粒體琥珀酸脫氫酶（輔酶FAD）的作用下脫氫氧化生成延胡索酸，脫下的氫使FAD還原成FADH2，再經電子傳遞鏈傳遞，即FADH2→Q→細胞色素（b→c1→c→aa3），最后與氧結合生成水。
在體外實驗中，組織細胞生物氧化生成琥珀酸的量可采用在琥珀酸脫氫時伴有顏色變化的化合物作氫受體來研究。
本實驗以2，6-二氯酚錠酚（DPI）為氫受體，藍色的DPI從還原型黃素蛋白（FADH2）接受電子，生成無色的還原型DPI·2H，藍色消失，其反應過程如下：
琥珀酸+FAD→延胡索酸+ FADH2
DPI（藍色）+ FADH2→DPI·2H（無色）+FAD
根據褪色時間可測定生物氧化過程中各代謝物與琥珀酸之間在代謝途徑中的距離。
試劑和儀器
一、試劑
磷酸鉀緩沖溶液（PBS ，50mmol/L，pH7.4）：0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液500ml和0.2mol/L氫氧化鈉溶液395ml混合加水至2000ml。
豬心，2，6-二氯酚錠酚（1.5mmol/LPBS），葡萄糖溶液（90mmol/LPBS），琥珀酸溶液（90mmol/LPBS），乳酸溶液（90mmol/LPBS），NAD+（5mmol/L磷酸鹽緩沖溶液）。
二、儀器
絞肉機，紗布，細砂，研缽，冰浴，恒溫水浴。
操作方法
1. 心肌提取液的制備
稱取絞碎的心肌糜3g，置250ml燒杯中，加冰冷的去離子水 200ml，攪拌1min，靜置1min，小心傾去水層，同法洗滌3次后，以細紗布過濾并輕輕擠壓除去過多液體。將肉糜轉移至冰冷的研缽中，加等量細砂和PBS5ml，在冰浴中研磨至糊狀，再加PBS15ml，抽提（至少5min），雙層紗布過濾，濾液收集于試管，置冰浴中備用。 2. 底物的氧化
取6支試管編號，按下表依次加入各試劑（單位ml）
將試管搖勻后于37℃中保溫5min，加已經37℃水浴預保溫5分鐘的心肌提取液各1ml，混勻并繼續保溫。
3. 觀察
觀察各管顏色變化，記錄各管褪色時間，30min不褪色者記為不褪色。分析實驗結果所說明的問題。
注意事項
1. 無色（還原型）DPI·2H與氧接觸可重新氧化成藍色的（氧化型）DPI，所以觀察本實驗結果時切勿振搖試管。
2. 體外實驗亦可用甲烯藍作為受氫體，再類似實驗條件下藍色的甲烯藍（氧化型）受氫還原成無色甲烯藍（還原型）。
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