比色分析技術(shù)原理和分類
分光光度法是利用單色器（主要是棱鏡）獲得單色光來測定物質(zhì)對光吸收能力的方法。物質(zhì)對不同波長的光波具有選擇吸收的特性，分光光度法就是基于物質(zhì)的這種特性而建立起來的分析方法，它是光譜分析技術(shù)中最基本和最常用的方法，因其具有靈敏、準確、快速、簡便、選擇性好等特點而被廣泛應用。
一、比色分析的基本原理
比色分析技術(shù)是利用物質(zhì)對光的吸收作用來對物質(zhì)進行定性或定量分析的技術(shù)。分光光度法是光譜分析技術(shù)中最常用的一種，應用最多的是紫外 - 可見光分光光度法。
（一）吸光度與透光度
當一束光線通過均勻、透明的溶液時可出現(xiàn)三種情況：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透過溶液。設入射光強度為 I 0 ，透射光強度為 I ， I 和 I 0 的比值稱為透光度（ transmittance ， T ），即 T ＝ ，其數(shù)值小于 1 。 T 與 100 的乘積稱為百分透光度，以 %T 表示。透光度的負對數(shù)稱為吸光度 (absorbance ， A) 。其表達式為：
A ＝－ LgT ＝－ Lg ＝ Lg
（二） Lambert-Beer 定律
Lambert-Beer 定律指出當一束單色的輻射能通過介質(zhì)或溶液后，有一部分被吸收，其輻射能的吸收與溶液中吸收物質(zhì)的濃度和溶液厚度的乘積成正比。 Lambert-Beer 定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體。 Lambert-Beer 定律是描述溶液吸光度同溶液濃度和溶液液層厚度之間關(guān)系的基本定律，該定律是分光分析的理論基礎。
其表達式為：
A ＝ KLC
式中， A —— 吸光度；
K —— 吸光系數(shù)；
L —— 溶液厚度，稱為光徑；
C —— 溶液濃度。
根據(jù) Lambert-Beer 定律，當液層厚度單位為 cm ，濃度單位為 mol/L 時，吸光系數(shù) K 稱為摩爾吸光系數(shù)（ ε ）。 ε 的意義是：當液層厚度為 l cm ，物質(zhì)濃度為 l mol/L 時，在特定波長下的吸光度值。 ε 是物質(zhì)的特征性常數(shù)。在一定條件（入射光波長、溫度等）下，特定物質(zhì)的 ε 不變，這是分光光度法對物質(zhì)進行定性的基礎。通過對某物質(zhì)已知濃度的溶液測定其吸光度，可求得該物質(zhì)的 ε ，其表達式為：
ε ＝
式中， ε —— 摩爾吸光系數(shù)；
A —— 吸光度；
L —— 溶液厚度；
C —— 溶液濃度。
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