氨基酸單向紙層析
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br style="box-sizing: border-box;"/>1、通過(guò)氨基酸的分離，學(xué)習(xí)并掌握紙層析
的原理和操作技術(shù)；
2、掌握分配層析法；
3、掌握影響分配系數(shù)的因素。
層析分離技術(shù)
z是利用被分離的混合物中各組分物理化學(xué)的性質(zhì)（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、分子親和力、分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相（流動(dòng)相和固定相）中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離。
z層析分離技術(shù)在20世紀(jì)初就已得到應(yīng)用；
z1903年用于植物色素的分離；
z1931年用氧化鋁柱分離了胡蘿卜素的兩種同分異構(gòu)體；
z1944年出現(xiàn)了以濾紙作為支持物的紙層析。
z層析分離的種類(lèi)很多：
z1、按流動(dòng)相的狀態(tài)分類(lèi)：
（1）液相層析
（2）氣相層析；
z2、按固定相的使用形式分類(lèi)：
（1）柱層析
（2）紙層析
（3）薄層層析等；
z3、按分離過(guò)程所主要依據(jù)的物理化學(xué)性質(zhì)分類(lèi)：
（1）吸附層析
（2）分配層析
（3）離子交換層析
（4）凝膠層析
（5）親和層析等。
二、實(shí)驗(yàn)原理
z紙層析：
是以濾紙作為支持物的分配層析法，是20世紀(jì)40年代發(fā)展起來(lái)的一種生化分離技術(shù)。由于設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，所需樣品量少，分辨力較高等優(yōu)點(diǎn)而廣泛的用于物質(zhì)的分離，并可進(jìn)行定性和定量的分析。缺點(diǎn)是展開(kāi)時(shí)間較長(zhǎng)。
z分配層析法：
是利用物質(zhì)在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數(shù)不同，而達(dá)到分離的目的的一種實(shí)驗(yàn)方法。在一定條件下，一種物質(zhì)在某種溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)是一個(gè)常數(shù)即α=溶質(zhì)在固定相的濃度/溶質(zhì)在流動(dòng)相的濃度。
z溶劑系統(tǒng)：由有機(jī)溶劑和水組成，水和濾紙纖維素有較強(qiáng)的親和力，因而其擴(kuò)散作用降低形成固定相，有機(jī)溶劑和濾紙親和力弱，所以在濾紙毛細(xì)管中自由流動(dòng)，形成流動(dòng)相，由于混合液中各種氨基酸的分配系數(shù)值不同，其在兩相中的分配數(shù)量及移動(dòng)速率（即遷移率Rf值）就不同，從而達(dá)到分離的目的。
z移動(dòng)速率：R f =原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離。
影響Rf值的主要因素：
zR f 決定于被分離物質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)以及兩相間的體積比。由于在同一實(shí)驗(yàn)條件下，兩相體積比是一常數(shù)，所以主要決定于分配系數(shù)。不同物質(zhì)分配系數(shù)不同，R f 也就不同。
（1）物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和分子極性：
結(jié)構(gòu)不同極性不同，在兩相中的溶解度也就不同，物質(zhì)的極性決定了物質(zhì)在水和有機(jī)溶劑之間的分配情況，極性大的易溶于水中即固定相中，R f 小；反之R f 則較大；
（2）層析溶劑：
首先，溶劑的純度要高，否則需經(jīng)預(yù)先處理（酸堿抽提，重蒸餾，脫水干燥等）；其次，溶劑系統(tǒng)選擇應(yīng)考慮被分離的物質(zhì)在溶劑系統(tǒng)中的Rf在0.05～0.85，樣品被分離物質(zhì)的組分的R f 之差最好大于0.05。再次，有些溶劑系統(tǒng)需必須新鮮配制，如正丁醇-甲酸-水系統(tǒng)久放易引起酯化；最后，溶質(zhì)和溶劑之間若能形成氫鍵，對(duì)分配系數(shù)的影響很大；
（3）pH值：
溶劑、濾紙和樣品的pH值都會(huì)影響物質(zhì)的解離，從而影響物質(zhì)的極性和溶解度，使R f 改變；溶劑的pH還可以影響流動(dòng)相的含水量，溶劑的酸堿度大，吸水量多，使極性物質(zhì)的R f 增加（將濾紙和溶劑用緩沖溶液處理）；
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