EdU-告別細(xì)胞增殖的煩擾

細(xì)胞增殖是評價細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見，能夠在DNA復(fù)制時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成的DNA分子中，基于Apollo?熒光染料與EdU的特異性反應(yīng)即可直接并準(zhǔn)確地檢測出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)、病毒繁殖等方面的研究，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種藥物的細(xì)胞增殖及活力篩選實(shí)驗(yàn)。

超越BrdU

傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復(fù)，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復(fù)雜繁瑣。

并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結(jié)合，必須先進(jìn)行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。如果變性不充分，會導(dǎo)致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導(dǎo)致細(xì)胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導(dǎo)致DNA斷裂，甚至降解，導(dǎo)致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致，造成難以確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性，且容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

圖1 BrdU需要DNA變性，但變性過分或沒有變性都可能容易導(dǎo)致BrdU結(jié)果假陽性

與BrdU方法相比，EdU檢測方法無需DNA變性，無需抗原修復(fù)，無需抗原抗體反應(yīng)，更簡單、更靈敏、更快速、更準(zhǔn)確，是細(xì)胞增殖檢測的最佳選擇。

圖2 BrdU與EdU檢測原理示意圖表1 BrdU與EdU檢測優(yōu)缺點(diǎn)比較

更準(zhǔn)確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整；

更簡單--無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法，簡單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘；

更靈敏--無需抗體，檢測染料僅為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測；

更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期僅需2.5小時；

更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征。

圖3 BrdU需要DNA變性后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致BrdU、Hoechst染色彌散，邊緣模糊不清；而EdU邊緣清晰完整，檢測更靈敏、更準(zhǔn)確

多種染料配套

EdU細(xì)胞增殖方法簡單，方便，無需DNA變性，能夠與各種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，以檢測細(xì)胞其他性狀特征。為了與其他熒光共同使用，銳博生物提供多種染料供選擇，覆蓋常用檢測通道，方便您輕松選擇適合的染料，最大限度地?cái)U(kuò)展第三方染色的適用范圍，最大限度地滿足您的檢測儀器要求，完全解決您的實(shí)驗(yàn)難題。

圖4 三種染料激發(fā)光譜和發(fā)射光譜（虛線：激發(fā)光譜；實(shí)線：發(fā)射光譜）

圖5 三種染料分別檢測EdU孵育2h的Hela細(xì)胞（40X）

EdU細(xì)胞增殖檢測方法不需要劇烈的DNA變性操作，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點(diǎn)，更適合結(jié)合其他染料或蛋白標(biāo)記（如P65抗體）等進(jìn)行多重標(biāo)記，從而在細(xì)胞水平獲取更多的直觀多維特征信息，更適合深入開展細(xì)胞功能方面的研究。