原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟

1、器官和組織的選擇

盡可能的去除不必要的組織和血跡。

2、原代細(xì)胞的分離

（1）應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I、II、III。

（2）根據(jù)組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒。

3、原代細(xì)胞的培養(yǎng)：

（1）PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基

（2）PriCells原代細(xì)胞特制添加物

（3）優(yōu)質(zhì)胎牛血清

4、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：

PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒

5、原代細(xì)胞的傳代、保存

（1）傳代：依椐細(xì)胞的生長狀態(tài)，生長的細(xì)胞1：2或1：3進(jìn)行傳代。

（2）保存：DMSO＋培養(yǎng)液＋血清

按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃ 過夜）→液氮。

6、原代細(xì)胞的復(fù)蘇

（1）取出細(xì)胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。

（2）吸出細(xì)胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。

（3）用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃ CO2 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

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