大鼠心肌細胞分離

大鼠心肌細胞比乳鼠心肌難養，用無血清培養基，呈桿狀，橫紋清楚，在培養基里細胞不搏動。

大鼠心肌細胞分離一般是采用二型膠原酶分離，濃度為1mg/ml（用無鈣臺氏液配制），同時酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠開胸后，迅速取出心臟，放入冰的臺氏液中，找到主動脈后，掛上Langendorff裝置，衡流泵灌入無鈣臺氏液（37度），開始心臟會搏動幾下，這樣把心臟中的淤血擠出（此處也有人用有鈣臺氏液灌流，好讓心臟充分搏動，把淤血擠出，不過我們摸索發現只要取心臟到掛上去的時間短，一般搏動幾下就能把淤血清楚干凈了）。

幾分鐘后，換酶液開始灌流心臟，一般開始時，心臟較軟，待消化一段時間后變硬，繼續消化后又變軟，且心臟發白，這時候就可以停止消化，將心室剪下，放入KB液中，用剪刀剪碎后，用滴管吹打，取上清，繼續加入KB液，吹打，直到上清液不渾濁為止，一般吹打3－4次即可。將各次上清合并，吹打過濾后，沉降20分鐘左右，棄上清，加入無血清培養基（MEM，不含L－谷氨酰胺，并加入肌酸，牛磺酸，BSA，肉毒堿，HEPES），吹打，1000轉/分離心半分鐘，棄上清，再洗1－2次后，將沉淀加入到6％的BSA中沉降15－20分鐘（純化心肌細胞），然后計數，點板或培養。

此法中如果各步注意無菌操作，最后先用加倍雙抗的培養基培養24h后，再換正常培養基，可適用于條件不是很好的試驗室。如果能在板或瓶內加入Laminin處理后，貼壁很好。如果分離出來的心肌細胞，逐級復鈣后培養，狀態更好。最佳狀態此中方法能培養7天以上。

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