16HBE14o－細(xì)胞株的傳代

此種細(xì)胞的培基最好用是DMEM！以前我們用1640，但生長及其緩慢。

正常情況下，2天換一次液,4-6天傳代一次.

傳代過程：

1、直接倒掉DMEM培基

2、pbs將細(xì)胞洗2次

3、倒掉pbs

4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培養(yǎng)瓶

5、水平放置培養(yǎng)瓶，消化3－5分鐘

6、顯微鏡下觀察：細(xì)胞形態(tài)變圓，而且細(xì)胞間界限明顯后，或有極少數(shù)細(xì)胞漂浮起來就可終止消化。

7、加入完全培基/血清中止消化（我的做法是：不倒掉胰酶）

8、吹打：動作要快。按一定的順序進(jìn)行吹打，尤其是邊緣和角落往往是16HBE14o－細(xì)胞長得最密的地方。如果不吹打徹底，會對下一次的傳代造成影響。吹打時，我個人比較喜歡用較大的吸管，這樣的話液體就很難進(jìn)入倒吸耳球，減少污染的可能。

9、補(bǔ)足培養(yǎng)基，如有多瓶傳代，移至同一培養(yǎng)瓶內(nèi)，混勻細(xì)胞，分裝傳代。

如果急著做試驗(yàn)的話，通常1傳2。如果不著急試驗(yàn)，通?？梢?傳3或者4。

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