原代胎兒腎小球系膜細胞培養
取引產胎兒腎,無菌操作,1小時內完成。2用生理鹽水沖洗干凈。
取腎皮質,用小外科剪剪成碎麼。依次研磨過80目,100目,200目篩網,不斷用生理鹽水沖洗,最后在200目篩網上收集腎小球,
先用0。4%的膠原酶四消化半小時,接種于50ML的培養瓶里,加含有20%小牛血清的DMEM培養基放二氧化碳培養箱培養。
三天后可在倒置鏡下觀察見有細胞貼壁生長。
一周后換液一次,以后約三到四天就能長滿瓶底。
此時可常規傳代,到第三代時,基本上生長的全是腎小球系膜細胞了,
這時要進鑒定了,方法包括:常規HE染色,細胞免疫組化(小鼠抗人肌動蛋白單抗,角蛋白單抗,等),電鏡(掃描,透射)。純度達95%以上時可用于實驗。
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