色譜柱再生——污染填料后對(duì)色譜柱的處理過(guò)程

1、故障現(xiàn)象

用戶反映YWG C18 10μ（4.6mmX150mm）色譜柱使用20天左右后，柱壓升高約1Mpa左右，分離效果變差，用蒸餾水清洗色譜柱沒(méi)有明顯改善。

色譜柱分離度不好，柱效不高，可能是用戶分析發(fā)酵液，簡(jiǎn)單的過(guò)濾后進(jìn)樣分析，其中的蛋白質(zhì)等可能沒(méi)有去除完全，致使過(guò)多的蛋白質(zhì)沉淀在色譜柱中，加之對(duì)沉淀的蛋白質(zhì)沒(méi)有及時(shí)沖洗，長(zhǎng)時(shí)間后，破壞C18官能團(tuán)，而且客戶使用純水長(zhǎng)時(shí)間沖洗色譜柱，官能團(tuán)坍塌的可能性也很大。色譜柱壓力增加，可能是柱頭篩板被樣品雜質(zhì)堵塞，或者填料被污染或被流動(dòng)相破壞，導(dǎo)致柱床層堵塞。

2、檢測(cè)

用10%乙腈水，1.0ml/min的流量沖洗色譜柱，沖洗大約30分鐘，將色譜柱中可能存在的磷酸緩沖鹽置換掉。然后用85%甲醇流動(dòng)相，尿嘧啶、硝基苯、萘、芴反相樣品評(píng)價(jià)色譜柱：

可見(jiàn)色譜峰形非常差，可能是柱頭污染，色譜柱中部分填料已經(jīng)被污染便性，柱頭打開(kāi)，發(fā)現(xiàn)柱頭部分色填料已經(jīng)變，部分填料板結(jié)在篩板和四氟墊圈的周圍，屬于典型的由于樣品雜質(zhì)引起色譜柱填料污染導(dǎo)致的色譜柱性能下降。

3、修補(bǔ)與再生

將柱頭污染填料挖出，用同樣規(guī)格的新填料進(jìn)行修補(bǔ)并更換新篩板，然后用85%的甲醇流動(dòng)相。在相同條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果如下圖所示，可見(jiàn)雖然色譜柱性能有所改善，但是還需要進(jìn)行再生處理。

對(duì)于C18或相應(yīng)的反相色譜固定相，一般采用洗脫能力比較強(qiáng)的有機(jī)溶劑進(jìn)行再生，圖3是用異丙醇溶劑，0.5ml/min流速下，沖洗色譜柱4小時(shí)后，換用85%甲醇評(píng)價(jià)譜圖，可見(jiàn)色譜柱性能有比較明顯的改善。

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