劃痕實驗方法總結：如何解決劃痕寬度不一致的問題

基本原理：

細胞劃痕實驗（Wound Healing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。

劃痕實驗在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程，是研究細胞遷移的體外試驗方法中最簡單的方法。

實驗方法：

基本的步驟包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。

傳統實驗方法是使用移液器吸頭在單層細胞上手動制造“劃痕”，該方法雖然操作簡單，成本低廉，但存在“劃痕”不一致的缺陷，即使實驗者反復練習也很難保證“劃痕”寬度一致，往往導致實驗重復性差，實驗結果可信度低。

Ibidi Culture Insert方法是解決傳統方法“劃痕”寬度不一致的有效方法，該方法通過培養插件能夠得到寬度一致的500um “劃痕”，是進行劃痕實驗的首選方法。

Culture Insert方法詳細實驗步驟：

準備材料：細胞，培養液，culture Insert（如圖 德國ibidi公司購買），鑷子。

1，準備細胞懸液：根據細胞類型將細胞懸液稀釋至3-7×105個/ml，濃度控制在24小時內融合成單層。

2，在培養插件的每個孔中加入70ul細胞懸液，放入培養箱中培養。

3，細胞貼壁后，使用滅菌的鑷子移除培養插件。

4，加入無血清培養基培養。

5，每隔4-6小時拍照記錄。

6，根據收集圖片使用Wimasis分析實驗結果。

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