新型隱球菌的檢測方法

新型隱球菌是隱球菌屬家族中主要致病病原菌，含5個血清型,包括A、B、C、D和AD型。它在免疫抑制患者中的感染發病率約為5％-10％，在免疫功能正常的人群中感染率約為十萬分之一，可以感染人體的任何組織和臟器，最常見的部位是中樞神經系統，其次為肺部和皮膚。

墨汁涂片、真菌培養、隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗是常用的真菌學檢測方法。墨汁涂片可以早期、快速診斷隱球菌感染。真菌培養是確診隱球菌病的“金標準”。隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗對隱球菌中樞神經系統感染的診斷具有非常好的敏感性和特異性。

1、 墨汁染色

腦脊液等標本離心取沉淀物或者挑取菌液1環涂于潔凈玻片上，然后加印度墨汁1環，覆蓋玻片后鏡檢。陽性結果應為：有厚莢膜和有細胞核的出芽（圓形或卵圓形芽生孢子，孢子外有一寬厚的莢膜包裹，菌體透亮，莢膜可比菌體大1-3倍，菌體內有一個至幾個反光顆粒，即脂質顆粒）。

該法是診斷隱球菌感染直接而快速的檢測方法，但在發病的初期，墨汁染色鏡檢1～3次往往常呈陰性，需要反復多次檢查。據文獻報道，有病例在第6次腦脊液墨汁染色鏡檢才找到隱球菌。出現假陰性的原因，一方面可能是發病早期病原學檢出率低；另一方面，隱球菌主要集中在腦膜或腦室脈絡叢肉芽腫細胞內，導致穿刺取樣的困難；同時培養時間的長短也影響陽性的檢出率，大多實驗室隱球菌培養一般是5天左右發報告，但有的隱球菌培養第10天左右才出現陽性，故易造成漏診。

2、真菌培養

新型隱球菌于25-37°C環境下均可生長，在SDA斜面瓊脂上，呈奶油色酵母菌落；SDA固體培養基（不能含會抑制隱球菌生長的放線酮）上菌落圖片呈球形或橢圓形，不同于念珠菌的卵圓形，很少見到菌絲。

3、隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗

利用免疫學方法，在乳膠顆粒上吸附隱球菌抗體，待檢樣本存在隱球菌莢膜多糖抗原時可發生特異性凝集反應。

該方法具有較高的敏感性和特異性，在早期快速診斷中明顯優于傳統的培養法和鏡檢，但不可避免假陽性和假陰性的存在。有文獻報道，系統性紅斑狼瘡、結節病、類風濕因子、巨球蛋白以及毛孢子菌屬、二氧化碳噬纖維菌屬和抗酸桿菌，均與新生隱球菌莢膜多糖抗原存在交叉抗原，引起假陽性；另一方面，操作過程中乳膠手套中的滑石粉、洗滌反應板中的清潔劑污染腦脊液標本，也可引起假陽性。而高濃度隱球菌抗原所致的鉤狀現象和體內未知非特異性蛋白對隱球菌抗原的掩蓋效應，卻能夠引起假陰性。