Ａβ?lián)p傷模型
取出生1-2d的乳鼠，用麻醉劑處死。在D-hanks液中取大腦并分離海馬組織，胰蛋白酶消化，獲得細(xì)胞懸液，胎盤藍(lán)染色進(jìn)行死活細(xì)胞記數(shù)，將細(xì)胞以5×105/ml的密度接種于預(yù)先經(jīng)L-多聚賴氨酸處理的96孔和24孔培養(yǎng)板,其中24孔板中預(yù)先放置有蓋玻片。細(xì)胞維持在培養(yǎng)液中，置入5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后全換液，接種當(dāng)天為第一天,每3d半量更換培養(yǎng)液一次，培養(yǎng)第3天時加入阿糖胞苷,終濃度為10μmol/Ｌ,以抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的過度增殖,24ｈ后更換全部培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),第10天進(jìn)行細(xì)胞造模，開始實驗。
也可以用PC12細(xì)胞株,常規(guī)培養(yǎng)
Ａβ產(chǎn)物誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞，建立細(xì)胞模型：
選擇Ａβ25-35片段,用三蒸水配制成100μmol?Ｌ-1,過濾,分裝,-20℃凍存;使用前老化處理并配制成所需濃度。（將Ａβ25-35溶解在DMSO中，在用DMEM稀釋，置于37℃下孵育7-14天，即為老化狀態(tài)）。
細(xì)胞模型建立:加入濃度為20μmol/L的Ａβ25-35,接觸24h,誘導(dǎo)建立AD細(xì)胞模型.
檢測指標(biāo):MTT LDH 凋亡 細(xì)胞內(nèi)鈣離子 以及SOD等
