微生物培養(yǎng)需要的基礎(chǔ)培養(yǎng)基及特殊培養(yǎng)基的制備

微生物 基礎(chǔ)培養(yǎng)基是人工配制的用于培養(yǎng)微生物的一個混合營養(yǎng)制品，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中含有維持微生物正常生長的營養(yǎng)物質(zhì)，此培養(yǎng)基的PH值一般為7.2-7.6。某些特殊的微生物需要的PH可能偏酸或偏堿性。

培養(yǎng)基是根據(jù)微生物生長繁殖時對營養(yǎng)物質(zhì)的需要而配制的營養(yǎng)制品，含有營養(yǎng)物質(zhì)及適宜的酸堿度，經(jīng)滅菌后使用。

常用的培養(yǎng)基按用途分為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基及厭氧培養(yǎng)基。按物理性狀分為固體、半固體和液體三種。

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了解常用的液體、固體、半固體培養(yǎng)基的成分、制備方法和用途。

實驗材料：

牛肉、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂 、0.1mol/lNaOH溶液、酚紅指示劑、蒸餾水等。

實驗方法：

一、肉湯培養(yǎng)基

1、 將鮮牛肉除去筋膜和脂肪，切成小塊后用絞肉機絞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸餾水的比例混合后，置4℃冰箱過夜。

2、 次日取出浸泡物倒入容器內(nèi)煮沸半小時，使肉渣凝固，也可煮沸一小時不經(jīng)冰箱過夜。

3、 用紗布和脫脂棉過濾，除去肉渣，即成肉浸汁。加入1%蛋白胨及0.5%氯化鈉，加熱溶解并用蒸餾水補足蒸發(fā)失去的水分。

4、待冷至50℃左右時，調(diào)該溶液的pH至7.4~7.6。校正pH的方法為：

①取三支與標準比色管(pH7.6)相同的空比色管，其中一管內(nèi)盛放蒸餾水5ml;另外兩管各加入欲測的肉湯培養(yǎng)基5ml，其中一管內(nèi)加0.02%酚紅指示劑0.25ml(滴定管)，搖勻。

②按圖2所示排列，舉起比色架，對光觀察。若滴定管色調(diào)較淡或為黃色，即表示培養(yǎng)基偏酸性，需滴加0.1mol/L

NaOH矯正;若呈深紅色，即表示偏堿性，應(yīng)滴加0.1mol/L

HCl矯正;使之與標準比色管色澤相同為止。通常未矯正前的肉湯均呈酸性。記下用去的NaOH(或HCl)溶液量，由此計算出矯正全量培養(yǎng)基時所需NaOH(或HCl)溶液量。

1、 酸堿度矯正后，加熱煮沸10分鐘，用濾紙過濾，補足水分，再調(diào)一次pH值。

2、 分裝肉湯于三角燒瓶或試管，瓶口、管口加棉塞并用紙包扎。

3、 置高壓滅菌器內(nèi)103.43Kpa20分鐘滅菌備用。

可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量為0.3%，其余成分相同(如蛋白胨、氯化鈉等)加熱溶解，調(diào)節(jié)pH至7.6左右，煮沸10分鐘，補充失水、過濾、分裝，滅菌后備用。

二、固體培養(yǎng)基

1、在上述制備的肉湯中加入2-3%的瓊脂。瓊脂為海藻中提取的一種多糖類物質(zhì)，本身無營養(yǎng)作用，不能被細菌 利用。因其加熱到100℃后可溶化，冷卻至40℃左右又可凝固，故可作為賦形劑。加熱溶化，脫脂棉過濾，補足失水，分裝三角燒瓶和試管。

2、置高壓滅菌器內(nèi)103.43Kpa滅菌20分鐘，取出后趁熱將試管傾斜一定角度放置，待瓊脂凝固即成瓊脂斜面培養(yǎng)基(圖3)。三角燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基冷至50-60℃時在超凈臺或無菌室內(nèi)將其傾注于滅菌平皿內(nèi)(15-20ml)，凝固后即成瓊脂平板。

圖： 瓊脂斜面培養(yǎng)基

另外，實際工作中現(xiàn)多使用合成營養(yǎng)瓊脂干燥粉末制劑。其方法為：稱取41克營養(yǎng)瓊脂干燥粉末加入1000ml冷蒸餾水中混合放置10分鐘，隔石棉鐵絲網(wǎng)微火煮沸使其完全溶解，分裝于中試管中(約5~7ml)或三角燒瓶，103.43kPa(121℃)滅菌15分鐘，即可備用。

三、半固體培養(yǎng)基

1、操作方法同固體培養(yǎng)基，但瓊脂加入量較少，僅0.3-0.5%。

2、分裝試管，滅菌后使試管直立，冷凝后即成半固體培養(yǎng)基

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入少量瓊脂即為半固體培養(yǎng)基，加入高濃度的瓊脂就成為固體培養(yǎng)基，因此可以說基礎(chǔ)培養(yǎng)基是配置特殊培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，配置任何培養(yǎng)基它的成分里都一定會含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的。常見的微生物基礎(chǔ)培養(yǎng)基有營養(yǎng)肉湯、蛋白凍水等等。