單克隆抗體的制備與鑒定方法
生物幫之抗體制備
摘要：
從人臍靜脈分離的內皮細胞經培養后免疫 Balb/c小鼠，利用小鼠雜交瘤技術，建立了一株持續分泌抗人內皮細胞單克隆抗體的雜交瘤。對其進行了較系統的鑒定，其抗體類別為IgG1。該單抗特異性地識別人內皮細胞，而與血細胞無交叉反應。
關鍵詞：單克隆 抗體，內皮細胞
前言：
血管內皮細胞具有多種生理功能，參與機體的凝血，免疫 ，物質轉運和生物活性物質釋放等重要的生命活動。因為血管內皮細胞損傷已成為許多疾病發生發展的基本病理過程，外周血液中內皮細胞數目的變化是血管受損的重要標志之一。本實驗旨在研制一人內皮細胞的單克隆抗體，研究血管內皮細胞的生理功能，及應用于臨床內皮細胞的檢測。
1.材料與方法
1.1人臍靜脈內皮細胞的培養
內皮細胞的培養
-)所須試劑及溶液的配制及保存。(所須水全用合格的去離子水 )
1)Hank,s液
用途：用于保存標本
配制：500ml
稱：Nacl 4 g KCL 0.2 g
MgSO4.7H2O 0.1 g Na2HPO4.12H2O 0.067 g
KH2PO4 0.03 g CaCL 0.07 g
葡萄糖 0.5 g
注意：A,在300-400ML水中依次溶解NaCL、KCL、MgSO4.7H2O、Na2HPO4.12H2O、KH2PO4、葡萄糖為A液。
B，在約50ML水中溶解CaCL2……液。
C，將B液緩緩倒入A液中，同時攪拌，……C。
D，在C液中加入1%酚紅1ML，混均，加水至500ML，該液即為HaNK,S液，此液便酸。
消毒：10磅10分種高壓消毒(消毒時壓力波動不能大，否則葡萄糖會沉淀出來，消毒完畢須等
冷卻方打開高壓鍋，以免液體沖出。)
保存：4度。
使用：在使用時加入 5。6% NaHCO3調PH至7·2左右，然后加入10%(體積/體積)青鏈霉素液。
2)5·6%NaHCO3液;
用途：調節溶液的PH值。
配制： 50ML
稱量：NaHCO3 2.8g
注意：在約40ML水中溶解NaHCO3，再加水至50ML即可，NaHCO3溶解緩慢，故可適當加熱
消毒：10磅10分鐘高壓消毒。
保存：4度。
3) 1%酚紅液;
用途：作溶液的指示劑。
配制：100ML
稱量：酚紅 1g
注意：A)在于1N NaOH 2ML溶液中溶解酚紅;酚紅較為困難，所以在研缽中進行，不斷研磨至溶。
B)待溶解后片刻，再加入1ML 1N NaOH
C)加水至100ML，配制完畢。
消毒：加入其它溶液中一起高壓滅菌。
保存： 4度。
4) 青/鏈霉素原液;
濃度：1萬單位青霉素、1萬單位鏈霉素或1Mg鏈霉素/ML。
配制：*無菌操做*
A)80ML水10磅10分鐘高壓滅菌。
B)溶解80萬單位的青鏈霉素于80ML水中。
分裝：1～2ML小分裝。
保存：-20度
使用：按1%(體積/體積)加入溶液中，終濃度100萬單位青鏈霉素/ML
5) L-谷氨酰胺液;
濃度：30mg/ML
配制：10ML
稱量：L--谷氨酰胺10ML
消毒：過濾除菌。
保存：小分裝存于--20度
使用：A)用時終濃度為0.3Mg/ML
B)具體用法：M199《含血清》/L-谷氨酰胺=100ML/1ML
注意：化凍后混均。
