RIP技術(RNA結合蛋白免疫沉淀)
RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。
RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來,然后經過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉淀ChIP技術的類似應用,但由于研究對象是RNA-蛋白復合物而不是DNA-蛋白復合物,RIP實驗的優化條件與ChIP實驗不太相同(如復合物不需要固定,RIP反應體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶,抗體需經RIP實驗驗證等等)。RIP技術下游結合microarray技術被稱為RIP-Chip,幫助我們更高通量地了解癌癥以及其它疾病整體水平的RNA變化。
RIP 實驗基本原理:
1. 用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白。
2. 防止非特異性的RNA的結合。
3. 免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來。
4.結合的RNA序列通過microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量測序(RIP-Seq)方法來鑒定。
延伸閱讀:95%的人類基因組并不編碼基因,而是產生大量的非編碼RNA,真正編碼蛋白質的基因只占人類總基因組的約2%。這些非編碼RNA在生命的生長發育的各個階段都發揮著重要的調節作用,與艾滋病、白血病、糖尿病、畸形等多種病變密切相關,并且參與著干細胞和表觀遺傳學調控。
而RNA-蛋白復合物驅動了幾乎所有細胞過程的基因表達的轉錄后調控,包括剪接(splicing)、出核轉運(nuclear export)、mRNA 穩定性以及蛋白轉譯過程,因此,對基因調控的了解就有賴于確定這些過程中RNA的結合的變化。因此,RNA研究也被越來越多的科學家重視起來,目前已經成為生命科學研究中一個炙手可熱的領域,而RIP技術也逐漸成為RNA研究領域的一項常規方法,幫助我們了解越來越受關注的轉錄后調控網絡。