RNA抽提方法
一、準(zhǔn)備工作
1、實驗器具與材料：
（1）移液槍：1ml、200ul、10ul
（2）吸頭：1ml、200ul、20ul
（3）吸頭臺：放置1ml吸頭的一個，放置200ul和20ul的吸頭一個
（4）EP管1.5ml、100ul
（5）玻璃研磨器
（6）容量瓶：1000ml
（7）鹽水瓶：100ml
（8）15ml塑料管一個（配75%乙醇用）
2、實驗器具的處理與準(zhǔn)備
（1）塑料制品：（包括吸頭、EP管等）
將塑料制品逐個浸泡于1‰DEPC水中（必要時小槍頭需要用吸管打入DEPC水）37℃過夜，然后送至高壓3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小時左右烘干），試驗前將槍頭放入吸頭臺。
（2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器）
先泡酸過夜，沖洗干凈后，在1‰DEPC水中泡8小時左右，37℃烘干，用蒙錫紙包裹送至干烤3次。
（3）金屬制品：（鑷子等）
先洗干凈，再送干烤3次。（不需要泡DEPC水）
3、試劑配制和準(zhǔn)備：
（1）DEPC水：泡實驗器具的DEPC水的配制：1000ml雙蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中靜置4小時后備用。配75%乙醇的DEPC水的配制：100ml鹽水瓶內(nèi)裝40ml雙蒸水，加40ulDEPC，37℃過夜，送至高壓。
（2）75%乙醇（要在抽提時現(xiàn)配）：用無水乙醇和DEPC水配制（DEPC水：無水乙醇=1：3），然后放于-20℃?zhèn)溆谩?/span>
（3）異丙醇：放入棕色瓶
（4）氯仿：放入棕色瓶
（5）Trizol：100ml/瓶存放于4℃
二、抽提時注意事項：
全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤換，避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。
三、抽提步驟
1、勻漿化作用
取約100mg鼠腦組織放于玻璃研磨器內(nèi)，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨組織后，倒入1.5mlEP管中，再在研磨器內(nèi)加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。顛倒混勻10下，室溫靜置5分鐘。
2、分離階段
每1mlTrizol中加0。2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15秒，使其充分混勻，室溫靜置5分鐘。后12000rmp離心15分鐘。
3、RNA的沉淀
將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5mlEP管中（約400-500ul），加入0.5ml異丙醇，混勻后放于-20℃中1小時，后12000rmp離心10分鐘。
4、RNA的洗脫小心倒掉上清，留取沉淀。加1ml現(xiàn)配的75%的乙醇（預(yù)冷）振蕩洗滌RNA沉淀一次，后7500rmp離心5分鐘。
5、RNA的再溶解
小心倒掉上清，取沉淀置超凈工作臺開風(fēng)機吹干（約30分鐘，此時RNA沉淀變透明）。注意不能讓RNA沉淀完全干燥（會極大地降低它地可溶性）。再在管中加20ul的DEPC水溶解，在55-60℃下孵育10分鐘助溶。
6、RNA的保存
提取的RNA保存于-70℃超低溫冰箱中，或立即用于逆轉(zhuǎn)錄。
