RNA提取新手必讀

1. 使用正確的細胞或組織儲存條件

在樣品用液氮瞬間凍結之后，應該儲存在-80℃，千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會導致RNA的降解和損失。瞬間凍結的組織應該首先在超低溫條件下先研磨成粉，然后置于裂解液中進行勻漿。

RNAfixer使樣品儲存更為便利。儲存在RNAfixer中的細胞或組織可在室溫下穩定保存長達1個星期，在4℃可穩定保存長達1個月，或永久保存在-20℃。

2. 消除環境RNase的污染

為了得到完整的、高品質RNA,在整個RNA制備過程中，當RNA離開強蛋白變性劑（如離液裂解液或酚）的保護時，避免引入新的RNase污染就非常關鍵。由于RNase幾乎是無所不在，所以必須確保與純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作臺、玻璃器皿和制膠設備，都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過，去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe.必須保證一直使用無RNase的槍頭、試管和溶液，手套也應經常更換。

3.迅速滅活內源的RNA酶，以防止RNA降解

以下3個方法均可有效使內源RNA酶失活：

1）用含離液（如胍鹽）的細胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。

2）用液氮瞬間凍結樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結，以確保瞬間令RNA酶失活。

3）立即將樣品置于RNAfixer無液氮RNA樣品儲存液中。它是一種水相、無毒的收集試劑，能立即穩定并保護完整、未凍結的組織和細胞樣品中的RNA.關鍵要點是組織樣品切片一定要夠薄（<0.5 cm），這樣RNAfixer才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。

4. 選擇合適破壁方法

細胞或組織的徹底勻漿對RNA提取來說，是一個很關鍵的步驟，它能夠防止RNA的損失和降解。勻漿的方法應根據細胞或組織的類型來選擇。大部分培養的細胞可以置于細胞裂解液中，通過簡單的渦旋震蕩來勻漿；而動物組織、植物組織、酵母和細菌、真菌則常常需要更加劇烈的方法，通常用液氮研磨。比如說細菌（特別是革蘭氏陽性菌）的細胞壁，就需要溶菌酶消化來實現徹底的細胞裂解和RNA的最大回收，酵母提取時加入破壁酶幫助破壁，再用TRIpure或RNApure進行提取。