細(xì)胞總RNA的提取

1. 六孔板每孔細(xì)胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，槍頭吹打。

2. 將各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振搖15s。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃，12,000g，15min）。

3. 離心后液體分為三層（上層－無色水樣層為RNA，中層白色為DNA和底層紅色為蛋白質(zhì)），小心吸取上層無色液體移入一新的EP管中。

4. 加入等體積異丙醇，0.4－0.5ml，混勻，15-30℃下孵育10－30min，離心（4℃，12，000g，10min）。其中如果加入等體積異丙醇后，置于試管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。

5. 去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩渦振蕩30s，離心（4℃，7,500g，5min）。

6. 小心去上清，管內(nèi)沉淀在超凈臺中鼓風(fēng)靜置干燥3-5min。最好是用槍頭吸取上清，盡量除去。

7. 加入20ul DEPC水溶解，分裝5ul/管，-70℃冰箱保存。

8. 細(xì)胞總RNA的鑒定：0.9-1.2％瓊脂糖電泳鑒定細(xì)胞總RNA，觀察出現(xiàn)條帶及各條帶亮度。紫外分光光度計測定：分別測定細(xì)胞總RNA在260nm和280nm處的光密度值(OD)，并計算RNA的含量和純度。