RNA抽提：加入異丙醇沉淀離心后出現(xiàn)的油滴類似物

最近利用trisol（Qiagen公司）進(jìn)行肝臟病理標(biāo)本RNA抽提，按照試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的樣本，置于1ml的trisol中勻漿；

勻漿結(jié)束后室溫放置5min左右，加入200ul氯仿，以振蕩器劇烈震蕩15秒混勻，室溫或冰上（此處各家說(shuō)法不一，我自己測(cè)試好像沒(méi)有發(fā)現(xiàn)很大差異）放置5-10min；4度，12000g離心15min，吸取上清至新的1.5ml離心管中；在上清中加入等體積（一般加500ul）的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置5-10min；

4度離心，12000g，10min；此時(shí)應(yīng)該出現(xiàn)一小片白色沉淀，緊貼管壁，去掉上清；加入1ml 75％乙醇洗滌，再次12000g離心（此處標(biāo)準(zhǔn)protocol為7500g，但我們一般用12000g）10min；小心去掉上清，晾干后加入50ul的DEPC 水并水浴促溶。整個(gè)過(guò)程就是這樣。

現(xiàn)在問(wèn)題是：在加入異丙醇后，原先是先出現(xiàn)乳白色的渾濁層，在顛倒混勻后，液體又回復(fù)澄清狀，而現(xiàn)在是顛倒混勻后不能回復(fù)澄清狀態(tài)，而是呈現(xiàn)乳濁液，離心后，在試管底部會(huì)發(fā)現(xiàn)看起來(lái)類似油滴狀的東西，白色或者帶點(diǎn)黃色，其體積跟樣本的量是成大概正比的關(guān)系。

只要出現(xiàn)了這種東西，樣本產(chǎn)生的RNA沉淀就無(wú)法貼壁，只有對(duì)著燈光，把油狀物搖散了才能夠看到里面的RNA沉淀，有時(shí)還會(huì)影響沉淀的形成，只有通過(guò)多次離心才能析出沉淀，昨天做的其中有三管離心離了三次才出沉淀，加起來(lái)有45min。這種東西乙醇清洗也不能去除，洗完后體積基本不變。

如果在加DEPC水之前，不把這種東西去除掉，跑出的膠圖像經(jīng)常是很亮的smear，或者是三條帶，在28s的上面還有一條莫名其妙的帶出現(xiàn)，而且?guī)畏浅２缓谩Ｈ绻脴尡M量把這種東西吸除干凈的話，結(jié)果并不能改善多少。試過(guò)酚氯仿重新抽提純化，結(jié)果是幾乎沒(méi)有任何的改善。

這種情況之前碰到過(guò)，當(dāng)時(shí)是用新鮮小鼠肝臟做的test，在試了各種方法無(wú)效之后，更換了trisol試劑，結(jié)果立刻就理想了，當(dāng)時(shí)認(rèn)為是trisol過(guò)期或者變質(zhì)之類的原因。但這次trisol是新近購(gòu)買的，才用了三四次而已。并且是在前一天做了一次test，結(jié)果非常好，但第二天就出現(xiàn)這種情況了，可以保證在使用過(guò)程中，試劑沒(méi)有被污染。

打電話給一些公司技術(shù)支持，回答說(shuō)沒(méi)有碰到類似情況，但一個(gè)同事講，他之前也碰到類似的情況，也試過(guò)酚氯仿重抽提，但沒(méi)有效果，而且后面的RT-PCR之類的后續(xù)試驗(yàn)都做不出結(jié)果。總之是只要看到這種東西，整個(gè)試驗(yàn)全都廢了。

想著把這種東西吸出來(lái)送到什么地方去檢測(cè)其成分，但現(xiàn)在還沒(méi)想出什么地方可以提供這種服務(wù)。這種東西應(yīng)該不是普通的油烴，密度比水跟異丙醇的溶液要大，不知是否是氯仿。

現(xiàn)在想請(qǐng)教各位達(dá)人，是否有人碰到同樣情況，如何才能避免，如果避免不了是否有什么可以補(bǔ)救的處理手段。