生物學入門：關于TRIzol 提取總RNA的介紹
TRIzol是廣譜型中RNA提取試劑。廣泛應用于植物材料、動物組織、細胞及各種微生物等樣品中提取RNA.本試劑能夠提取完整的RNA。加入氯仿離心后，溶液分為三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相，RNA分布在上層水相中，收集上清層后，經異丙醇沉淀便可以回收得到總 RNA。提取的總 RNA 完整性好，無蛋白和 DNA 污染，可用于各種分子生物學常規實驗，如 RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、DotBlot、體外翻譯等。
實驗試劑：
TRIzol（德元國際Cat# LY6151）、無水乙醇、氯仿、異丙醇、75%酒精、液氮
實驗用具：
高速離心機、研缽、移液器，離心管，一次性手套、口罩等
操作步驟：
1. 樣品處理
1） 動物組織：取新鮮或-70℃凍存動物組織盡量剪碎，每30-50mg 組織加入1mlTRIzol（德元國際Cat# LY6151），勻漿儀進行勻漿處理?；蛟谝旱醒心ズ蠹尤隩RIzol1ml（德元國際Cat# LY6151）混勻。
2） 植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎后直接在TRIzol（德元國際Cat# LY6151）中迅速研磨，每30-50mg 組織加入1mlTRIzol，混勻。
3） 單層培養細胞：吸去培養液，加入適量TRIzol（每10cm2面積1mlTRIzol），反復吹打使細胞裂解。如果TRIzol的量不足可能導致RNA中有DNA污染。
4） 細胞懸液：不洗滌細胞，直接離心收集細胞。每5×106－1×107動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加入1mlTRIzol（德元國際Cat# LY6151）。
可選步驟：當樣品富含蛋白質，脂肪，多糖或是細胞外物質例如肌肉，脂肪組織和植物的塊莖部分時可能需要一額外的分離步驟。勻漿化后在2~8°C的條件下以12,000×g的離心力離心10分鐘，移除勻漿中不溶解的物質，余下的沉淀中包含有細胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而RNA存在于上清中。對于脂肪組織的樣品中，大量的脂肪漂在最上層也應該除掉。吸取上清備用。
2. 將勻漿樣品反復吹打幾次，在室溫條件下靜置5min，使蛋白核酸復合物完全分離。
3. 向以上溶液中加入氯仿，每使用1mlTRIzon加入0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置2-3min。
4. 4℃ 12,000 rpm離心15分鐘，此時樣品分成三層：紅色有機相，中間層和上層無色水相，RNA 主要在水相中，把水相（約600μl）轉移到一個新的離心管（自備）中。
5. 在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇，顛倒混勻，室溫放置10分鐘。
6. 4℃ 12,000rpm 離心10分鐘，棄上清。
7. 加入75%乙醇（用無RNase的水配制）洗滌沉淀。每使用1mlTRIzol用1ml75%乙醇對沉淀進行洗滌一次。
8. 4℃ 12,000rpm離心3分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。
9. 室溫放置3-5分鐘，晾干。加入30-100μl無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。
