僅擴(kuò)增全長(zhǎng)cDNA末端的高級(jí)RACE方法

為了獲得全長(zhǎng)的cDNA 5’及3’末端序列，許多研究人員使用了稱之為cDNA末端快速擴(kuò)增，或RACE的方法。傳統(tǒng)的RACE方法得到的PCR產(chǎn)物含有全長(zhǎng)及斷裂的cDNA產(chǎn)物。GeneRacer?試劑盒確保您只得到含有全長(zhǎng)cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的結(jié)果并節(jié)省您的時(shí)間

GeneRacer?的優(yōu)點(diǎn)：

確定一個(gè)基因的全長(zhǎng)序列對(duì)于研究異源轉(zhuǎn)錄起始和得到用于蛋白表達(dá)的開放閱讀框至關(guān)重要。GeneRacer?是一種高級(jí)RACE技術(shù)，提高了擴(kuò)增全長(zhǎng)cDNA末端序列的效率。使用GeneRacer?試劑盒，您可以得到：

完整序列： 克隆基因片段的全長(zhǎng)5'和3'末端以構(gòu)建完整的cDNA序列

靈敏： 得到每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)低至30的稀有轉(zhuǎn)錄本的全長(zhǎng)5’和3’末端

長(zhǎng)度： 可以由長(zhǎng)度至少為9kb的轉(zhuǎn)錄本得到cDNA

僅通過(guò)一輪PCR反應(yīng)就可以得到這些結(jié)果。一般不需進(jìn)行巢式PCR，所以僅試一次就可以得到結(jié)果。

全長(zhǎng)5’末端選擇：

傳統(tǒng)的RACE會(huì)得到多個(gè)PCR結(jié)果，因?yàn)槠渌褂玫腸DNA來(lái)源于斷裂及全長(zhǎng)mRNA。研究人員必須鑒定每一個(gè)PCR產(chǎn)物以獲得帶有全長(zhǎng)5’末端序列的產(chǎn)物。GeneRacer?只針對(duì)全長(zhǎng)的5’加帽mRNA，從而節(jié)省了花費(fèi)在篩選大量PCR產(chǎn)物上的時(shí)間。圖一 示意GeneRacer?的工作原理。RNA樣品經(jīng)CIP和TAP處理，保證GeneRacer?寡聚RNA僅同全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本連接。然后使用SuperScriptⅡ逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)這些轉(zhuǎn)錄本逆轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA做為PCR的模板。GeneRacer?寡聚RNA序列做為GeneRacer? 5’引物結(jié)合位點(diǎn)，這樣，只有具有全長(zhǎng)5’末端的cDNA才會(huì)被擴(kuò)增。使用GeneRacer?步驟及高保真度Platinum? Taq DNA聚合酶，就可以確保得到最高效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。