關于RNA提取的幾個問題
RNA快速提取程序
組織RNA的提?。?將約10～100 mg的組織塊置于勻漿儀中，加入1 ml RNA快速提取 試劑 ，進行勻漿；將勻漿液傾入1.5 ml 離心管 中，加入0.1體積的氯仿，振蕩混合20 s；冰上放置5 min；4℃離心12 000 r. min－1 , 15 min。 離心管 中的液體分為3層: 上層為無色透明的無機相，RNA保留于此相中；下層為呈淡黃色的有機相，蛋白質保留于此相中；上下兩層的界面處為中間層，DNA 保留于此相中。小心吸取上層水相約0.5 ml于新管中，切勿吸取中間層和下層液體，以避免DNA 和蛋白質的污染。異丙醇沉淀：加入等體積的－20℃預冷的異丙醇，混勻，4℃離心12 000 r. min－1 ，15 min, 棄上清；用0.5 ml預冷的80％(體積分數)乙醇洗滌沉淀，棄盡乙醇，在空氣中自然干燥，溶于適量DEPC處理的水中，用于后續的實驗或－80℃保存。
RNA的質量、純度鑒定和濃度測定
取1～2 μl RNA樣品在15 g. L－1 瓊脂糖凝膠上進行電泳 ，檢查RNA的質量，主要觀察28 S、18 S和5 S三條帶是否清晰，有無降解，以及是否有DNA 污染。
取1～2 μl RNA樣品溶于1 ml超純水中，用紫外分光光度法測定D值。以D260 值計算其濃度，計算公式:
質量濃度(g. L－1 )=40×D260 ×稀釋倍數/1000
以D260 /D280 的比值表示其純度，比值在1.8～2.0之間為純的RNA，比值低于1.8，說明RNA樣品有蛋白質或酚的污染，需要用氯仿重新抽提。
勻漿方式對RNA質量的影響
在實驗中我們發現不同的勻漿方式對RNA的質量有明顯的影響。通過反復實驗發現，用超聲勻漿儀勻漿易引起RNA的降解，且RNA的回收率很低；用手動玻璃勻漿器進行組織勻漿，獲得的RNA無降解，回收率高，而且操作簡單，是一種較理想的組織勻漿方式。
