納他霉素的含量測(cè)定
本品為(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-氨基-3, 6-二脫氧-β-D-吡喃甘露糖基)氧基]-1,3,26-三羥基-12-甲基-10-氧代-6,11,28-三氧雜三環(huán)[22.3.1.05·7]二十八烷基-8,14,16,18,20-五烯-25-羧酸，按無(wú)水與無(wú)溶劑物計(jì)算，含C33H47NO13應(yīng)為90.0%-102.0%。
1、性狀
本品為類白色至淡黃色結(jié)晶性粉末。
本品在冰醋酸中溶解，在N,N-二甲基甲酰胺中略溶，在甲醇中微溶，在乙醇和水中幾乎不溶。
2、鑒別
取本品50mg，加水5mL潤(rùn)濕，再加0.1%冰醋酸甲醇溶液溶解并稀釋制成每1mL中約含5μg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401）測(cè)定，在317nm、303nm和290nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。
在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。
3、檢查
3.1 結(jié)晶性
取本品，依法檢查（通則0981）測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。
3.2 酸堿度
取本品0.25g，加水制成每1mL中約含10mg的混懸溶液，依法測(cè)定（通則0631），pH值應(yīng)為5.0~7.5。
3.3 有關(guān)物質(zhì)
照高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定，避光操作。
供試品溶液：取本品20mg，置100mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲約15分鐘使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
對(duì)照溶液：精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
系統(tǒng)適用性溶液：取那他霉素20mg，置100mL量瓶中，加鹽酸甲醇溶液（取0.1mol/L鹽酸1mL，加甲醇99mL，混勻）適量，搖勻，放置2小時(shí)，即得（1小時(shí)內(nèi)使用）。
靈敏度溶液：精密量取對(duì)照溶液5mL，置100mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6mm×250mm，5μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱），以乙酸鐵緩沖液（取乙酸銨3.0g和氯化按1.0g，加水760mL溶解并混勻）-乙腈-四氫呋喃（76:24:0.5）為流動(dòng)相，柱溫40℃（必要時(shí)可適當(dāng)?shù)蚬?jié)柱溫），檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm，進(jìn)樣體積20μL。
系統(tǒng)適用性要求：系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，納他霉素峰保留時(shí)間約為14分鐘，那他霉素峰與雜質(zhì)Ⅰ峰（相對(duì)保留時(shí)間約為1.3）之間的分離度應(yīng)大于2.5，理論板數(shù)按那他霉素峰計(jì)算不小于3000，那他霉素峰拖尾因子為0.8~1.3。靈敏度溶液色譜圖中，那他霸素峰高的信噪比應(yīng)大于10。
測(cè)定法：精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。
限度：供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，雜質(zhì)Ⅰ峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%），其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%），小于靈敏度溶液主峰面積的峰忽略不計(jì)。
3.4 殘留溶劑
照殘留溶劑測(cè)定法（通則0861）測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。
3.5 水分
取本品，照水分測(cè)定法（通則0832第一法1）測(cè)定， 含水分應(yīng)為6.0%~9.0%。
3.6 熾灼殘?jiān)?/span>
取本品1.0g，依法檢查（通則0841），遺留殘?jiān)坏眠^(guò)0.2%。
3.7 重金屬
取熾灼殘?jiān)?xiàng)下的遺留殘?jiān)?，依法檢查（通則0821第二法），含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之十。
4、含量測(cè)定
照高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定。
4.1 供試品溶液
取本品約20mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲約15分鐘使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
4.2 對(duì)照品溶液
取那他霉素對(duì)照品20mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲約15分鐘使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
系統(tǒng)適用性溶液與色譜條件見(jiàn)有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下。
4.3 系統(tǒng)適用性要求
除靈敏度要求外，其他見(jiàn)有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下。
5、測(cè)定法
精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。
