人臍靜脈內皮細胞的形態學觀察和鑒定方法

人臍靜脈內皮細胞爬片準備：細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征，并作相差攝影，同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法，在6孔培養板中放置載玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液，待細胞貼壁后，取出載玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min，PBS沖洗3次，每次2min,以消除內源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關抗原多抗工作液，放入濕盒內4℃過夜，同時另一蓋玻片不加一抗作陰性對照。次日，用PBS沖洗3次，每次2min,滴加辣根酶標記的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS沖洗3次，每次2min,用DAB底物混合工作液顯色，顯微鏡下觀察，待出現特異性染色后，終止顯色，進行復染，脫水，透明，封片，相差顯微鏡下觀察攝影。

人臍靜脈內皮細胞的形態學觀察：相差倒置顯微鏡下觀察，人臍靜脈內皮細胞貼壁單層生長，呈短梭狀或鋪路石樣鑲嵌排列，細胞為扁平多角形，邊界清楚，胞漿豐富。胞核清晰可見，為圓形或橢圓形。原代培養細胞，于接種后2h開始貼壁生長，傳代細胞約半小時后即開始貼壁生長。原代細胞一周左右可長滿，傳代細胞生長旺盛，有時可見多核細胞。

Ⅷ因子相關抗原免疫組化鑒定：人臍靜脈內皮細胞Ⅷ因子相關抗原免疫組化染色可見細胞呈圓形、梭形或多邊形，胞漿內可見棕黃色顆粒，核周密集，而對照組內未見著色。證實培養的細胞為內皮細胞。