慢性溫和不可預測性應激模型實驗（CUMS）

原理

慢性不可預知溫和應激 (CUMS) 模型實驗:體外給予如禁水、禁食、夾尾冰水游泳、感覺剝奪等刺激，經過 4 周的應激刺激導致受試機體的功能障礙，導致精神性疾病抑郁癥的發生。

用途

用于抑郁癥動物模型的構建。

慢性不可預知溫和應激 (CUMS) 模型

慢性束縛應激抑郁（ chronic restraint stress, CRS）模型

優點：

應激因素單一，易于操作。

不足：

模型穩定性差，受試動物易產生適應，后期癥狀出現自發改善。

材料與儀器

1. 材料：
1）鼠籠；2）墊料：3）水瓶：4）冰塊；5）照明燈；6）蔗糖；6) C57BL / 6J 小鼠;

2. 儀器：
1）制冰機；2）噪音儀器；3）電擊箱；4)強迫游泳桶；5）純水超純水機一體系統；6）體重秤；

步驟

1. 受試動物分籠喂養于室溫 25 士 2℃ 的室內，12 小時晝夜節律自由進食進水，給與無菌的飼料和干凈情潔的飲用水，適應 1-2w 天后，隨機分組，測試并記錄受試動物的體重糖水偏愛百分比等基線數據，剔除基線數據顯著差異的受試動物；

2. 依據分組，模型組每天隨機給予 1-2 個刺激條件，連續進行四周，刺激無規律；

3. 刺激因子包括：45 度傾斜鼠籠7h、禁水 24 h，禁食 24 h，噪聲（>80dB）3 h，潮濕墊料 24 h，冰水游泳 5 min，燈光晝夜顛倒 12h，合籠飼養 24h（6只一籠），足底電擊 1min；

4. 造模結束進行行為學測量(糖水實驗、曠場實驗、懸尾實驗等)，驗證模型。

1）45 度傾斜鼠籠：7 h，將鼠籠與水平面傾斜45度角放置；

2）禁水：24 h，剝奪飲水；

3）禁食：24h，剝奪飲食；

4）噪聲：3 h，高中音量，類似蛇音（>80 dB）；

5）潮濕墊料：24 h，向鼠籠中倒入清水,使墊料濕潤,以水位漫過墊料表面為度,維持浸濕狀態 24h,24h 后更換清潔墊料；

6）冰水游泳：5 min，將受試動物放入溫度調至 4℃ 的水中，受試動物的腳尖剛好能觸及到桶底， 5min 后將動物取出。

7）燈光晝夜顛倒：12h，天黑開燈照明；

8）合籠飼養：24h，6 只一籠，正常單獨但籠飼養；

9）足底電擊： 1min，受試動物置于電擊箱，持續 1min。

測量剝奪飲水后受試動物1h內的糖水和自來水消耗量(糖水和自來水雙瓶供飲)，計算獲得相對糖水消耗量(糖水消耗/體重× 100g )以及糖水偏好百分比(糖水消耗量/總液體消耗× 100% ),取三次測試平均值作為糖水測試基礎值。

具體步驟：

1）所有動物受訓飲用 1% 的蔗糖水,開始 48ｈ內，將訓練受試動物適應含糖飲水，將受試動物暴露于 1 瓶為１％的蔗糖溶液，另一瓶為清水；

2）禁水禁食 20ｈ后。給與每只受試動物定量好的兩瓶水：1 瓶１％蔗糖水、1 瓶清水，飲水 1 h。然后通過稱取飲水瓶的重量。計算獲得相對糖水消耗量(糖水消耗/體重× 100%)以及糖水偏好百分比(糖水消耗量/總液體消耗× 100%),取三次測試平均值作為糖水測試基礎值。

注意事項

1. 隨機給予刺激，連續兩次刺激不能相同，使受試動物不能預料刺激的發生；

2. 受試動物飼養空間隔音且足夠大；

3. 給予冰水游泳刺激時注意防止受試動物淹溺；

4. 固定實驗人員進行實驗操作。

常見問題

模型組和對照組無差異：

1）刺激時間造模不夠，適當延長造模時間；

2）進行造模實驗時，為了避免相互影響，應該盡量單籠飼養；

3）隨機時間隨機給予刺激因子，避免動物產生適應性。