凝膠滲透色譜及固相萃取凈化技術(shù)

材料與儀器

糙米
無水硫酸鈉 乙酸乙酯 氮氣 二氯甲烷-正己烷
凝膠色譜柱 Environed GPC凈化預(yù)柱 凈化柱 兩個定量環(huán) Waters510液相色譜泵 486紫外吸收檢測器

步驟

1.  提取

準(zhǔn)確稱取5.0 g樣品放入200 mL離心管中；加入40 mL乙酸乙酯和2 g無水硫酸鈉，均質(zhì)3次各1 min，用1O mL乙酸乙酯沖洗均質(zhì)頭，合并沖洗液。離心（2500 r/ min； 15 min； 25 ℃）收集上層澄清液。下層沉淀再加入40 mL乙酸乙酯，重復(fù)上述均質(zhì)和離心過程。將合并的上層澄清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮氣吹干。二氯甲烷-正己烷（1 + 1）轉(zhuǎn)移至10 mL離心管，定容至6 mL。高速離心 （3000 r/ min； 5 min）。

2.  凈化

GPC裝置：配備Environed GPC凈化預(yù)柱150 mm×19 mm，凈化柱300 mm×19 mm，兩個2.4 mL定量環(huán)，Waters510液相色譜泵，486紫外吸收檢測器。凝膠柱填充物為Bio-Beads SX3 200～400目。取上層澄清液4.8 mL進樣到GPC，梯度淋洗，加入淋洗液3 mL正己烷、5 mL乙酸乙酯-正己烷（5 + 95）各 一次，5 mL乙酸乙酯-正己烷（20 + 80）兩次，淋洗速度控制為1 mL/ min。收集 11.5 min之后的流動相90 mL，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮（80 r/ min， 40C）至近干，氮氣吹干。用正己烷定容至1 mL，制成備用樣液。弗羅里桂土柱（6 mL/1000 mg）先依次 用5 mL乙酸乙酯-正己烷（20 + 80）、5 mL乙酸乙酯-正己烷（5 + 95）和5 mL正己烷預(yù)清洗。取0.5 mL備用樣液過弗羅里硅土柱，棄去流出液。依次加入3 mL正己烷、5 mL乙酸乙酯-正己烷（5 + 95）各一次，5 mL乙酸乙酯-正己烷（20 + 80）兩次淋洗，淋洗速度控制為1 mL/ min。收集淋洗液15 mL。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（80 r/ min， 40 ℃）至近干，氮氣吹干。用正己烷定容至1 mL。GC/ECD檢測。