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乳酸脫氫酶(LDH)釋放法
發布日期:2022-06-20 09:23:53


乳酸脫氫酶(LDH)釋放法


1)測定方法


1.用含5%小牛血清的RPMI-1640培養液將靶細胞調整到5×104~2×105/ml,此濃度需根據情況預先標定。


2.在96孔圓底細胞培養板中加入靶細胞,每孔加100μl。3個效應細胞自然釋放對照孔不加靶細胞,只加100μl培養液。


3.向各孔加100μl效應細胞,效應細胞與靶細胞的比例根據要求而定,通常為5:1~20:1。自然釋放孔不加效應細胞只加100μl培養液,最大釋放孔中加100μl 1% NP40。每個實驗置三個復孔。


4.置37℃ 5% CO2的二氧化碳培養箱中培養4~6小時。


5.離心培養板200×g 10分鐘。每孔吸出150μl上清液,對應加入另一塊96孔酶聯檢測板中。向第二塊板每孔依次加20μl 0.4mol/L乳酸溶液、20μl 4mmol/L 2-p-碘苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑,20μl反應液(含0.03% BSA,2.7U/ml硫辛酰胺脫氫酶,4.5mmol/L氫化型輔酶I(NAD+),1.2%蔗糖的PBS),室溫中放置20分鐘。


6.在酶聯檢測儀上測定各孔的光密度(OD值),檢測波長492nm,參考波長650nm。


2)特異性殺傷活性的計算


殺傷活性(%)=[(OD實驗組-OD總自然釋放)/(OD最大釋放組-OD總自然釋放)]×100%





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